【摘 要】
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目的1.观察锌离子能否促进肺发育。2.筛选出与肺发育密切相关的SUMO化关键蛋白,观察SUMO化关键蛋白在小鼠胚胎时期肺发育过程中的空间分布及变化趋势。3.探讨UBC9在锌离子诱导肺发育过程中II型肺上皮细胞分化的调控作用。方法1.建立小鼠高锌模型,自母鼠怀孕第一天至生产后7天,模型组给予怀孕母鼠高锌饲料(90 mg/kg锌,Zn E),对照组给予怀孕母鼠正常饲料(30mg/kg锌,Zn A),两
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目的1.观察锌离子能否促进肺发育。2.筛选出与肺发育密切相关的SUMO化关键蛋白,观察SUMO化关键蛋白在小鼠胚胎时期肺发育过程中的空间分布及变化趋势。3.探讨UBC9在锌离子诱导肺发育过程中II型肺上皮细胞分化的调控作用。方法1.建立小鼠高锌模型,自母鼠怀孕第一天至生产后7天,模型组给予怀孕母鼠高锌饲料(90 mg/kg锌,Zn E),对照组给予怀孕母鼠正常饲料(30mg/kg锌,Zn A),两组分别于怀孕E12.5、E14.5、E16.5、E18.5、E20.5天及出生后1、4、7天采集和处理肺组织。2.肺组织切片经HE染色后,镜下观察不同时期高锌组和正常组肺组织。3.收集E14.5、E16.5、E18.5发育阶段的胎鼠肺组织标本,采用免疫组化法检测SUMO化关键蛋白的时空表达和变化趋势。4.收集E14.5、E16.5、E18.5及生后1、4、7天发育阶段的胎鼠肺组织,提取组织蛋白,通过Western blotting法检测不同时期肺组织UBC9表达水平。5.采用免疫组化和Western blotting法检测高锌组和正常组肺组织UBC9表达水平。6.建立肺泡II型上皮细胞高锌模型,创建UBC9干涉质粒,对细胞进行转染,采用Western blotting法和免疫荧光法检测肺上皮细胞特异性标记物表达情况,检测高锌状态及在UBC9干涉状态下肺泡上皮细胞的分化情况。结果1.HE染色结果显示,与正常组相比,高锌组的肺组织更早的形成原代支气管,可见上皮细胞扁平化,分支增多,终末气囊形态发生改变,间隔变薄,提示锌离子能够促进肺发育。2.免疫组化结果显示,与其他SUMO化关键蛋白相比,UBC9的变化更具有意义,在发育早期,UBC9蛋白呈高水平表达,并在整个肺发育过程中逐渐降低,Western blotting结果也证实相关结论,说明UBC9可能在肺发育过程中起着至关重要的作用。3.免疫组化和Western blotting结果显示,与正常组相比,高锌组的UBC9表达水平增加,说明锌离子可以促进肺组织中UBC9的生成,进一步验证了UBC9在肺发育过程中重要作用。4.Western blotting结果和免疫荧光结果显示,ZnCl2使AQP5蛋白表达增多,SP-C蛋白表达减少,转染UBC9 si RNA后,使AQP5蛋白表达减少,SP-C蛋白表达增多,ZnCl2诱导AT2细胞分化的作用明显减弱,说明锌离子通过UBC9诱导AT2细胞分化成AT1细胞。结论1.锌离子促进肺发育。2.UBC9在肺发育过程中至关重要。3.锌离子通过增加UBC9水平,进而诱导II型肺上皮细胞分化。
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