姜黄素对LPS刺激的人牙髓细胞炎症细胞因子表达及成骨分化的影响

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:george_ding
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目的:构建体外人牙髓细胞(human dental pulp cells,h DPCs)炎症模型,研究姜黄素对该模型h DPCs炎症相关细胞因子m RNA表达水平及成骨分化的影响。方法:1、CCK8法检测不同浓度大肠杆菌来源的LPS(Escherichia coli lipopolysaccharide,E.coli LPS)对h DPCs的细胞毒性作用。2、实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)检测不同浓度E.coli LPS刺激h DPCs 3、6、12、24h后炎症相关因子IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及COX-2的m RNA表达水平,ELISA检测E.coli LPS刺激h DPCs其IL-6的蛋白表达水平,从而筛选构建体外h DPCs炎症环境最适宜的E.coli LPS浓度及相应刺激时间。3、CCK8法检测不同浓度姜黄素作用h DPCs 24、48h后细胞活力值。4、Real-time PCR检测姜黄素对炎症环境下h DPCs IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及COX-2的表达调控作用,并检测不同浓度姜黄素与LPS组合后,h DPCs NLRP3的m RNA表达水平。5、成骨诱导培养7、14天,通过碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色及ALP活性实验检测姜黄素对LPS刺激的h DPCs ALP活性表达水平。结果:1、CCK8实验可见1,5,10μg/ml E.coli LPS刺激组与对照组相比,h DPCs细胞活力值均无显著差异(p>0.05)。2、1μg/ml E.coli LPS刺激h DPCs 3 h,可见IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及COX-2的m RNA表达水平上调(p<0.05)。且IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-8的m RNA表达量在第3 h达到高峰。此外,ELISA结果亦可见1μg/ml E.coli LPS刺激组IL-6的蛋白表达含量增加(p<0.05)。3、0.5,1,5μmol/L姜黄素组分别与对照组相比,48 h内h DPCs活力值均无明显差异(p>0.05),10μmol/L姜黄素组h DPCs活力降低(p<0.05)。4、Real-time PCR结果可见,与单独1μg/ml LPS刺激组相比,0.5μmol/L姜黄素+LPS刺激组h DPCs TNF-α表达下调(p<0.05);1μmol/L姜黄素+LPS刺激组h DPCs IL-1β、TNF-α及COX-2表达下调(p<0.05);5μmol/L姜黄素+LPS刺激组h DPCs IL-1β、TNF-α及IL-6表达下调(p<0.05);而0.5,1或5μmol/L姜黄素+LPS刺激组h DPCs IL-8的m RNA表达水平均未有显著改变(p>0.05)。5、Real-time PCR结果可见,5μmol/L姜黄素+LPS刺激组h DPCs NLRP3基因表达下调(p<0.05)。6、ALP染色及ALP活性实验可见,连续培养7天,单独LPS成骨诱导组与无LPS成骨诱导组相比,h DPCs ALP活性未见明显差异(p>0.05)。0.5,1μmol/L姜黄素+LPS成骨诱导组与单独LPS成骨诱导组相比,h DPCs ALP活性均无显著差异(p>0.05);连续培养14天后,单独LPS成骨诱导组h DPCs ALP活性表达降低(p<0.05)。1μmol/L姜黄素+LPS成骨诱导组与单独LPS成骨诱导组相比,h DPCs ALP活性表达上调(p<0.05)。结论:通过1μg/ml E.coli LPS刺激h DPCs 3 h,可成功构建体外h DPCs炎症模型。0.5~5μmol/L姜黄素抑制炎症环境下h DPCs多种炎症细胞因子基因的表达,发挥一定抗炎作用。1μmol/L姜黄素可能通过抑制h DPCs炎症因子的表达从而改善其ALP活性表达水平,有利于其成骨或成牙本质向分化。
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