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丙型肝炎病毒(HCV)为单股正链RNA病毒,其基因组编码约3010~3033aa的蛋白前体,从N-端起依次为核心蛋白(C)、包膜蛋白(E)、非结构蛋白NS1-NS5B。HCV具有高度的变异性,能够迅速突变逃逸宿主的免疫系统。因此,给疫苗的研究带来许多的困难。近年来的研究提示理想的HCV疫苗必须能够诱发高水平、广谱而特异的体液免疫应答和细胞免疫应答。针对HCV的高度变异性及免疫特点,在HCV基因产物中优选了5个具有良好免疫原性的高度保守B/T细胞表位,组合成一个多表位抗原基因pcx,这些表位分别来自核心蛋白(1~16aa,132~141aa),E1(126~135aa),NS3(139~147aa)及NS5B(768~775aa),以及破伤风毒素的T细胞表位用以增强T细胞免疫。pcx基因经过串联重复之后,构建成多表位抗原基因pcx3,与6×His-tag融合后,在E.coli宿主中获得高效表达,并通过Ni2+-NTA-agarose纯化。以HCV蛋白疫苗PCX3为抗原,分别加入Al(OH)3佐剂,CpG ODN佐剂,以及两种佐剂联合作用的复合佐剂,对雄性六周龄BALB/c小鼠进行常规免疫。Al(OH)3和CpG ODN复合佐剂与PCX3抗原联合作用组与其他免疫组相比,在ELISA检测小鼠血清中特异性IgG和IgM抗体实验中,该组小鼠产生的特异性IgG(1×106)和IgM(1×105)抗体滴度最高,持续时间最长;在非放射性细胞毒活性检测试剂盒检测NK细胞的自然杀伤效应(CTL)实验中,该组小鼠诱发的CTL杀伤效应(40.91%),显著高于其他免疫组(P<0.05);流式细胞仪对小鼠淋巴细胞亚群进行分型分析发现,从第2周开始,该组小鼠体内CD4+/CD8+细胞比值(3.26)显著高于PCX3抗原单独作用组(P<0.05)。结果表明,Al(OH)3和CpG ODN复合佐剂,可以从体液免疫和细胞免疫两方面对HCV蛋白疫苗PCX3的免疫效果进行增强,并且具有协同效应。