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目的：调查哈尔滨市肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中质粒介导的喹喏酮类耐药基因(PMQR)的分布状况，调查PMQR基因携带株对喹诺酮类、β-内酰胺类、氨基糖苷类药物的耐药情况，分析PMQR菌株的耐药特性。 方法：从哈尔滨市4所三甲医院收集非重复的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌共307株，K-B纸片扩散法测定细菌对环丙沙星、左氧氟沙星、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素和阿米卡星等的药物敏感性；PCR方法检测菌株qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6)-Ib五种质粒介导喹诺酮耐药相关基因；限制性内切酶BtsCI酶切消化aac(6)-Ib PCR阳性产物以确定aac(6)-Ib-cr，并通过测序验证其序列；分析质粒介导的喹诺酮耐药基因与细菌喹诺酮类耐药性及β-内酰胺类、氨基糖苷类耐药性的关系。 结果：238株肺炎克雷伯菌中，对环丙沙星和左氧氟沙星耐药的菌株分别有100株和103株，耐药率为42.0％和43.3％。69株大肠埃希菌中，对环丙沙星和左氧氟沙星耐药的分别为55株和37株，耐药率为79.7％和53.6％。肺炎克雷伯菌中，携带PMQR的菌株共130株，占54.6％；其中qnrA、qnrB、qnrS基因分别检出2株、20株和14株，占0.8％、8.4％和5.9％；aac(6’)-Ib基因检出107株，其中30株经BtsCl酶切鉴定为aac(6)-Ib-cr基因；未检测到qepA基因。大肠埃希菌中，携带PMQR的菌株共44株，占63.8％；其中qnrA、qnrB、qnrS分别检出9株、8株和5株，占13.0％、11.6％和7.2％；32株检测到aac(6’)-Ib基因，其中13株经BtsCI酶切鉴定为aac(6)-Ib-cr基因；2株检测到qepA基因，占2.9％。 PMQR阳性菌株和阴性株对环丙沙星的耐药率是62.1％和37.6％，对左氧氟沙星的耐药率分别是52.9％和33.8％，差异均具有统计学意义(P<0.05)。携带PMQR基因并带有gyrA基因突变的菌株，对环丙沙星的MIC50和MIC90分别是64μg/ml和128μg/ml，均高于携带PMQR基因但未发生gyrA基因突变的菌株，后者中MIC50和MIC90分别是16μg/ml和32μg/ml。PMQR阳性株和阴性株对头孢曲松的耐药率分别是59.2％和45.9％，对头孢唑啉的耐药率分别是55.2％和42.9％，差异均具有统计学意义(P<0.05)；PMQR阳性株和阴性菌株对庆大霉素耐药率为50.8％和52.6％，对阿米卡星的耐药率分别为43.7％和35.3％，差异无统计学意义(P>0.05)；aac(6’)-Ib-cr基因阳性株和阴性株对阿米卡星的耐药率分别为48.8％和36.7％，差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：本地区肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌临床分离株中，均检出质粒介导喹诺酮类耐药基因，肺炎克雷伯菌中qnrB、aac(6)-Ib-cr流行比较广泛，大肠埃希菌中qnrA、qnrB和aac(6)-Ib-cr流行比较广泛。在肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中，环丙沙星耐药水平的增强可能与gyrA基因变异和PMQR基因的协同作用相关。