木糖醇广泛应用于医药、食品、化工等领域。工业上主要以化学合成法生产木糖醇，分离纯化复杂，成本较高。天然微生物发酵生产木糖醇，产量和转化率较低。本文旨在克隆休哈塔假丝酵母(Candida shehatae)木糖还原酶（XYL1）基因，使之在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)H158中表达，从而构建可直接生产木糖醇的酿酒酵母基因工程菌。　　实验提取休哈塔假丝酵母基因组DNA经PCR后，得到长度与目的基因相当的片段。测序结果显示休哈塔假丝酵母木糖还原酶基因开放阅读框长度972bp，编码323个氨基酸。结果与GenBank上公布的序列完全相同。　　目的基因片段双酶切后连接到酿酒酵母穿梭质粒pYES2上，构建表达载体pYES2-XYL1。醋酸锂转化法将其转化酿酒酵母后，获得较多酿酒酵母阳性菌落。取阳性菌落经菌落 PCR和质粒双酶切法鉴定验证了重组表达质粒pYES2-XYL1在酿酒酵母中DNA水平的存在。　　用2％的β-D-半乳糖诱导培养酿酒酵母转化子，结果在细胞破碎液中检测到木糖还原酶酶活。因此该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的木糖还原酶。诱导培养72h，木糖还原酶酶活达到最高值0.138U/mL，培养时间在72h～84h时，木糖还原酶酶活急剧下降。　　酿酒酵母转化子对1％木糖进行发酵实验，测木糖醇产量。在培养基中加入β-D-半乳糖诱导物，发酵60h～72h时，发酵液中木糖醇含量迅速上升。发酵培养84h，木糖醇达到最高值6.155g/L，木糖醇转化率为67％。不加诱导物发酵培养，发酵液中检测不到木糖醇。