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mTOR (mammalian target of rapamycin雷帕霉素靶蛋白)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,在细胞生长、增殖、分化、细胞周期调控等多个方面起到了重要作用。其信号通路参与调节与肿瘤密切相关的多项细胞功能,是近年来肿瘤研究的热点,其中E-BP1(eukaryotic translation initiation factor4E binding protein1真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1)和S6K1(Ribosomal protein S6kinase beta-1核糖体S6蛋白激酶1)是研究的热点,也是mTOR最具特色的底物。EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯,Epigallo catechin-3-gallate)是茶叶中的主要活性成分,它作为茶树自身的天然产物,具有抗氧化,清除自由基等功能,对人体健康和长寿具有重要意义。本研究旨在探讨EGCG体外抑制宫颈癌HeLa细胞分生及其机制,深刻揭示喝茶的保健机理,为EGCG作为保健药品的开发和利用奠定理论基础。实验在形态观察的基础上,采用CellTiter-Blue法检测EGCG (0μM、10μM、25μM、50μM和100μM)处理HeLa细胞之后,HeLa细胞的生长曲线;流式细胞术检测EGCG处理对HeLa细胞周期的影响,观察EGCG对HeLa细胞分生的抑制作用;采用Western-blotting法检测了mTOR下游底物S6K1和4E-BP1蛋白的表达水平。实验结果显示,在低营养(0.5%牛血清)培养下,EGCG对HeLa细胞分生具有抑制作用,并呈浓度依赖效应,随着EGCG浓度的增加HeLa细胞周期被阻滞于S期和G2/M,4E-BP1蛋白水平随着EGCG的浓度增加而显著下降(25μM和50μM的EGCG处理:p<0.05,100μM EGCG处理:p<0.01,极其显著)。而在高营养(10%牛血清)培养下,EGCG处理前后,HeLa细胞的分生与对照组相比其100μM下的HeLa细胞分生曲线呈略微下降趋势,其他浓度并未呈现明显效果。在细胞周期方面,高浓度EGCG(50μM和100μM)处理组的HeLa细胞被一定程度阻滞于S期和G2/M。100μM的EGCG处理对S6K1蛋白水平的表达抑制具有显著作用,而EGCG处理对HeLa细胞4E-BP1蛋白水平表达并没有显著作用。因此,EGCG处理对HeLa细胞分生抑制具有一定作用,尤其是在低营养状态下,其对HeLa细胞的分生抑制作用随着浓度增加而增加。同时,低营养培养下,EGCG对mTOR底物4E-BP1蛋白的磷酸化水平随着处理浓度的增加而显著减少,有理由推断:4E-BP1可能是EGCG通过mTOR途径抑制HeLa细胞分生的靶点。同时,我们认为,用EGCG保健的同时,如果能控制营养能量水平,其保健效果可能会更好,更加深入、全面的研究值得继续进行。