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目的:目前,我国已成为世界上乳腺癌发病率增长最快的国家之一,在我国的很多大、中城市,乳腺癌在女性恶性肿瘤中已居第一位,并逐渐年轻化。因此,探索乳腺癌的发病机制,提高综合治疗效果,已成为当今乳腺癌研究领域的重点之一。乳腺癌是一类异质性很高的恶性肿瘤,侵袭和转移是病人死亡的最主要原因。基底膜和细胞外基质的降解和破坏(主要成分是Ⅳ型胶原、层粘连蛋白、纤维连接蛋白等)为肿瘤的侵袭和转移开辟了道路。多种蛋白酶家族可能促进肿瘤的侵袭转移,其中最主要的蛋白酶是基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs),它可破坏基底膜、降解细胞外基质,参与肿瘤的浸润和转移,还可通过改变细胞周围的微环境而促进肿瘤的发生和发展。迄今为止,人类中已识别和定性的MMPs有二十八种。在所有的MMPs中,MMP-1(Matrix Metalloproteinase-1,MMP-1)是第一个被纯化为蛋白和克隆成c DNA的脊椎动物胶原酶。有研究显示,MMP-1可以降解基底膜和细胞外基质,血管内皮细胞同时也被诱导增生,在肿瘤的浸润、转移过程中起着重要作用。但是相关的研究报道,尤其是在乳腺癌中有关MMP-1的研究报道甚少。本课题组前期研究发现,乳腺癌ER蛋白表达可以定位在细胞核和/或细胞质膜中,而且ER蛋白的表达定位与乳腺癌的生物学行为及预后密切相关。因此,本研究的目的是了解MMP-1蛋白在乳腺癌组织中的表达定位及蛋白表达量,以及MMP-1蛋白与乳腺癌患者临床病理特征,以及与ER和HER-2表达的关系,探讨MMP-1在乳腺癌发生、发展过程中所起的作用,为将MMP-1作为新的靶分子引入肿瘤的临床治疗提供理论依据。方法:1、样本来自2013年1月至2014年3月大连医科大学附属第二医院外科切除的浸润性乳腺癌手术标本,根据前期研究结果,从中筛选ER核阳性组(28例),ER质膜阳性组(23例),Her-2(3+)组22例,三阴性乳腺癌组(26例),共99例。所有患者均为女性,年龄32-86岁,平均年龄54岁。术前均未进行化疗、放疗等新辅助治疗。99例样本中非特殊性浸润性导管癌71例,浸润性小叶癌25例,粘液癌3例。2、采用免疫组织化学和Western-blot方法分别观察MMP-1蛋白在乳腺癌细胞核、细胞质及肿瘤间质中的表达定位及蛋白表达量,分析MMP-1蛋白表达定位和表达量与乳腺癌雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor,HER2)及临床病理特征的关系。3、全部的数据分析和统计学处理均采用spss17.0统计软件进行。由于比较对象的不同,根据情况分别采用c2检验、Spearman相关性分析、秩和检验(Kruskall-Wallis H检验)、独立样本T检验(Independent Samplet Test检验)等,以p<0.05表示差异具有统计学意义。结果:1、免疫组织化学:MMP-1蛋白表达定位于乳腺癌的癌细胞核、细胞质及肿瘤间质中。(1)MMP-1在癌细胞核阳性表达率为57.58%(57/99),细胞质阳性表达率为62.63%(62/99),其中,MMP-1在癌细胞胞核阳性表达率与患者的淋巴结转移状态、年龄、停经有关(p<0.05),而与患者的肿瘤的大小、组织分级、临床分期无关(p>0.05),在无淋巴结转移组、>50岁组和停经组中,MMP-1核阳性表达率分别高于有淋巴结转移组、≤50岁及无停经组;MMP-1在癌细胞胞质阳性表达率与淋巴结转移有关(p<0.05),而与患者的年龄、停经、肿瘤最大径、组织分级、临床分期无关(p>0.05),其中无淋巴结转移组MMP-1在癌细胞胞质中阳性表达率低于淋巴结转阳性移组;MMP-1在肿瘤间质中的阳性表达率为71.72%(71/99),MMP-1在肿瘤间质阳性表达率与淋巴结转移状况有关(p<0.05),而与患者的年龄、停经状况、肿瘤大小、临床分期无关(p>0.05),在淋巴结转移组中MMP-1在肿瘤间质中的阳性表达率高于无淋巴结转移组(p>0.05)。(2)MMP-1在乳腺癌中的癌细胞胞质中的表达率在三阴性乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer,TNBC)组最高(76.92%,20/26),其次为ER质膜阳性组(73.91%,17/23)。MMP-1在癌细胞核中表达率在ER核阳性组最高(89.29%,25/28)。MMP-1在肿瘤间质中的表达以TNBC组最高(92.31%,24/26)。(3)MMP-1在癌细胞胞核中的表达率与ki-67表达呈显著负相关(p=0.000,r=-0.353);MMP-1在癌细胞胞质中的表达率与ki-67表达呈显著正相关(p=0.007,r=0.270);肿瘤间质MMP-1表达率与Ki-67表达呈显著正相关(p=0.000 r=0.420)。2、Western-blot(1)MMP-1在TNBC组的表达量最高(33.90±7.56),与其他组比较,差异有统计学意义(p<0.05)。(2)MMP-1的表达量与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移有关,肿瘤直径>2cm组的MMP-1表达量高于肿瘤直径≤2cm组的蛋白表达量(p<0.05);临床分期Ⅲ+Ⅳ组的蛋白表达量高于Ⅰ+Ⅱ组的蛋白表达量(p<0.05);有淋巴结转移组的蛋白表达量高于无淋巴结转移组的表达量(p<0.05)。(3)MMP-1蛋白在ki-67(+)组的表达量高于ki-67(-)组(p<0.05)。结论:1.MMP-1蛋白表达定位于乳腺癌细胞胞核、细胞质及肿瘤间质中。2.MMP-1蛋白在乳腺癌癌细胞质及肿瘤间质中的表达水平与乳腺癌患者预后不良因素的相关。3.MMP-1蛋白在乳腺癌细胞核中的表达水平与患者预后较好的因素相关。4.MMP-1蛋白在HER-2(3+)乳腺癌和TNBC中表达量高于ER核阳性组乳腺癌,提示MMP-1高表达与乳腺癌患者预后不良相关。