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目的从广西产眼镜蛇(Naja)蛇毒中分离纯化磷脂酶A2(phospholipase A2, PLA2),并研究其理化性质及其对肝癌细胞生长的影响。方法(1)采用凝胶过滤层析法和离子交换层析法分离眼镜蛇粗毒,经平板法和自动电位滴定法测定各峰的PLA2活性,得到具有PLA：活性的组分Ⅰ(命名为DEAE Ⅰ),通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)、高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)和MALDI-TOF鉴定其纯度并测定分子量。(2)通过自动电位滴定法测定DEAE Ⅰ的最适温度、最适pH及热稳定性。并通过动物急性毒性实验,研究DEAE Ⅰ的LD5o。(3)通过MTT实验研究DEAE Ⅰ对正常成人肝细胞(HL-7702)和肝癌细胞(SMMC-7721)的细胞毒性,并用倒置相差显微镜观察细胞形态的改变。(4)利用扫描电镜观察DEAE Ⅰ对细胞形态学改变的影响。(5)采用流式细胞术,用Annexin Ⅴ/PI双染色法检测细胞凋亡,用PI染色法检测细胞周期,观察PLA2对细胞凋亡及周期的影响,进一步推测其作用机制。结果(1)通过凝胶过滤层析法和离子交换层析法,分离得到具有PLA2活性的组分Ⅰ(即DEAE Ⅰ),自动电位滴定法测DEAE Ⅰ的PLA2活力为66.12μmol/(mg*min);经SDS-PAGE,得出该组分的分子量约为14.4KD,且基本达电泳纯。该组分经HPLC-TSK2000凝胶柱鉴定,仅有单一峰,且基本对称,说明该组分基本达90%以上。经MALDI-TOF鉴定的分子量为13282.02Da。(2)自动电位法测得DEAE Ⅰ的最适温度约为50℃,最适pH在6.0附近,且具有良好的热稳定性。急性毒性实验结果显示,DEAE Ⅰ对昆明小鼠的半数致死剂量(LD50)为13.86±0.057mg/Kg,表明对动物的毒性较小。(3)将DEAE Ⅰ作用于HL-7702及SMMC-7721,通过其对细胞的剂量依赖性和时间依赖性的筛选,确定DEAE Ⅰ的最佳作用浓度为200μg/ml,最佳最用时间为48h。将200μg/ml的DEAE Ⅰ作用于细胞,发现其对HL-7702细胞的抑制率为66.34±12.62%：对SMMC-7721的抑制率为77.82±9.70%。统计分析表明,DEAE Ⅰ对细胞的抑制率与10μg/ml的CDDP对细胞的抑制率差别无统计学意义(p>0.05)；与粗毒(3μg/ml)、G50Ⅰ (40μg/ml)和CM Ⅰ (80μg/ml)比较,p<0.05,表明DEAE Ⅰ与之差别有统计学意义。将DEAE Ⅰ对SMMC-7721的抑制率与HL-7702比较,发现其对SMMC-7721的抑制作用稍强(p<0.05)。(4)细胞形态学的扫描电镜结果显示,DEAE Ⅰ作用24h能使少部分HL-7702和SMMC-7721形成有膜包围的含有核和细胞质碎片的大小不一的凋亡小体状结构,且细胞死亡较少；作用48h,两株细胞均见到明显的凋亡小体样结构,但HL-7702坏死较多。(5)流式细胞仪检测凋亡结果显示,DEAE Ⅰ作用24h后,HL-7702和SMMC-7721无明显的凋亡发生。延长作用时间至48h,DEAE Ⅰ作用于SMMC-7721诱导出现明显的凋亡,凋亡率为33.03%；而作用于HL-7702细胞的凋亡率仅为5.62%,但细胞碎片比较大增；而CDDP对两株细胞的抑制率分别为41.92%和87.37%。(6)细胞周期结果显示,DEAE Ⅰ作用24h后,HL-7702细胞S期值略增高,其他时相均有所下降；而SMMC-7721的细胞周期G0/G1期增加；而CDDP作用与两株细胞24h后,均见凋亡峰。作用48h后,DEAE Ⅰ可使两株细胞的G0/G1期数值均增加,CDDP可使HL-7702出现大量坏死。结论(1)分离得到的组分DEAE Ⅰ具有磷脂酶A：的酶活力,经SDS-PAGE和MALDI-TOF鉴定其分子量为13282.02Da。(2)电位滴定法测得的DEAE Ⅰ的最适温度在50℃左右,最适pH约为6.0,并具有良好的热稳定性。动物急性毒性实验表明DEAE Ⅰ对小鼠的毒性较小。(3)MTT结果显示200μg/ml的DEAE Ⅰ对细胞的作用与10μg/ml的CDDP相当；将DEAE Ⅰ对SMMC-7721的抑制率与HL-7702比较,发现其对SMMC-7721的抑制率稍强。(4)细胞形态学的电镜观察,DEAE Ⅰ能诱导SMMC-7721的凋亡,但对HL-7702的诱导作用稍弱。(5)采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,发现DEAE Ⅰ作用两株细胞48h均能诱导凋亡,但对HL-7702的诱导作用稍弱；并能使两细胞的G0/G1期增加。