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目的：1.确定甘草黄酮、甘草酸作用于人角质形成细胞(HaCaT细胞)的最佳浓度。2.研究中波紫外线(UVB)辐射对HaCaT细胞表达IL-10及TNF-α的影响。3.研究甘草黄酮和甘草酸对UVB诱导HaCaT细胞表达IL-10及TNF-α的调节作用。初步探讨甘草黄酮和甘草酸对UVB辐射后HaCaT细胞的保护作用及可能机制,为开发以甘草黄酮和甘草酸为主要成份的防晒外用制剂提供理论依据。方法：第一部分：复苏人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞株),于37。C、5%C02培养箱中培养,取对数期生长的细胞接种于96孔板。待细胞生长良好时,加入不同浓度的甘草黄酮及甘草酸溶液(25、50、100、200、400、800μg/mL),采用MTT法确定这两种药物作用于HaCaT细胞的最佳浓度。第二部分：待接种于6孔板内的HaCaT细胞完全贴壁后,实验组分别加入相应浓度的溶液,正常对照组及UVB对照组加入新鲜的含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基。24小时后以30 mJ/cm2剂量的UVB照射。照射后正常对照组组及UVB对照组每孔加入DMEM/F12培养液3 mL,实验组各孔加入不同相应浓度的溶液3 mL,37℃、5%C02培养箱孵育。分别于6 h、12 h、24 h、48h收集细胞培养上清液,每管500μL,采用酶联免疫法(ELISA)法检测细胞培养上清液中IL-10的含量。同时收集相应时间段的细胞提取总RNA,并采用实时荧光定量PCR法(QT-PCR)检测IL-10mRNA的表达。第三部分：方法同上。收集细胞培养上清液,采用ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α的含量。同时收集细胞提取总RNA,以实时荧光定量PCR法检测TNF-αmRNA的表达。结果：1.与对照组相比,甘草黄酮浓度在25、50、100、200μg/mL时,均对HaCaT细胞未表现出细胞毒性(P>0.05)；因此本实验选用100、200μg/mL的甘草黄酮溶液。而甘草酸浓度在25、50、100μg/mL时未表现出细胞毒性(P>0.05),故本实验中甘草酸溶液的浓度定为50、100μg/mL。2.正常HaCaT细胞有少量IL-10分泌,细胞经30 mJ/cm2的UVB照射后,IL-10分泌量在6小时升高,随后随着时间的延长逐渐降低,有统计学差异(P<0.05)；预先加入不同浓度的甘草黄酮、甘草酸后,各时间段IL-10分泌量明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)；两种药物相比,甘草黄酮对UVB辐射后的HaCaT细胞表达IL-10明显高于甘草酸,有统计学差异(P<0.05)；ELISA法对培养上清液中IL-10蛋白水平的表达及荧光定量PCR法对IL-10mRNA的表达的检测结果基本一致。3.正常HaCaT细胞可分泌少量TNF-α,细胞经30 mJ/cm2的UVB照射后,TNF-α分泌量明显升高,24h达高峰,有显著统计学差异(P<0.01)；预先加入不同浓度的甘草黄酮、甘草酸后均能降低TNF-α分泌量。50、100ug/mL甘草酸均可降低经UVB辐射细胞的TNF-α的分泌,且100ug/mL时效果最为显著,有显著统计学差异(P<0.01)；两种药物相比,甘草酸作用优于甘草黄酮,有统计学差异(P<0.05); ELISA法对培养上清液中TNF-α蛋白水平的表达及荧光定量PCR法对TNF-αmRNA的表达的检测结果基本一致。结论：UVB辐射对HaCaT细胞具有明显的损伤作用,其损伤机制与抗炎因子IL-10降低及炎症因子TNF-α增高密切相关。甘草黄酮和甘草酸对UVB诱导的HaCaT细胞损伤具有保护作用,且甘草黄酮可能是通过提高抗炎因子IL-10的表达量而起到保护作用的,甘草酸的保护作用则主要是通过降低炎症因子TNF-α的表达实现的。