威灵仙多糖的分离纯化及其活性研究

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本论文对威灵仙多糖进行分离纯化,得到了两种精制威灵仙多糖组分,并对其进行了研究。研究主要内容如下:威灵仙粗多糖提取工艺的优化。威灵仙药材粉碎后,先用乙醇回流除去单糖、寡糖等小分子物质,然后采用正交实验设计考察了料液比、提取时间、提取温度和醇沉浓度对粗多糖提取率的影响,并结合实际综合考虑提取效率、多糖性质等,最终确定最佳提取工艺:提取温度80℃、料液比1:15、提取时间15h、乙醇浓度80%。威灵仙多糖的分离纯化。威灵仙粗多糖经脱色、除蛋白后再经DEAE-SepharoseF.F分离,得到CCP-Ⅰ,CCP-Ⅱ,CCP-Ⅲ三个多糖组分。CCP-Ⅲ再经Superdex-200柱层析分离,得到威灵仙精制多糖CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb。威灵仙精制多糖(CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb)的性质及其结构的初步研究。通过苯酚-硫酸法、间羟联苯法、考马斯亮兰法、凝胶过滤法、琼脂糖凝胶电泳、紫外扫描等方法对CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb进行分析测定。采用红外、紫外、气相色谱、高碘酸氧化等手段对CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb的结构进行初步研究。结果如下:CCP-Ⅲa为均一组分,其总糖含量、糖醛酸含量、蛋白质含量分别为92.4%、27.6%、6.9%;CCP-Ⅲb也为均一组分,其总糖含量、糖醛酸含量、蛋白质含量分别为89.9%、39.5%、9.4%。它们的分子量分别为3.1×10~5Da、1.5×10~5Da。CCP-Ⅲa的单糖组成及摩尔比为:鼠李糖:阿拉伯糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=4.7:1:5.6:26.4:3.9;CCP-Ⅲb的单糖组成及摩尔比为:鼠李糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=1.5:1.0:25.8:16.3。它们没有典型的核酸和蛋白质等吸收峰;糖苷键主要为β-构型,且均含有1→3、1→6连接键型。威灵仙多糖CCP-Ⅲ抗氧化活性研究。威灵仙多糖CCP-Ⅲ具有清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的作用,可显著提高四氯化碳肝损伤小鼠血清和肝脏中SOD、GSH-PX活力,降低血清和肝脏中丙二醛(MDA)含量及肝脏指数。威灵仙多糖CCP-Ⅲ在体内外均具有显著的抗氧化作用,其抗氧化作用与清除氧自由基有关。威灵仙多糖抗肿瘤活性研究。威灵仙多糖CCP、CCP-Ⅲ、CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb在体外对人宫颈癌HeLa细胞株、人乳腺癌细胞株(MCF-7)均无明显抑制作用,而在体内均能抑制小鼠S180瘤体的生长,显著提高小鼠的胸腺指数和肝脏指数,增强小鼠机体的免疫力。CCP-Ⅲ抑制率最高,当剂量为80mg/kg时,抑瘤率达到41.8%。
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