猪旋毛虫病快速诊断试纸条的制备及应用研究

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旋毛虫病是人畜共患寄生虫病,在世界范围内普遍存在。人的旋毛虫病主要是食入了旋毛虫病猪肉而感染。由于猪对旋毛虫有很强的耐受力,感染后几乎不表现任何临床症状,这给诊断、检疫工作带来了不便。目前,猪旋毛虫病的检疫依然采用目测和镜检法为主,这种方法检出率低,费时费力,操作不便。其它诊断方法如酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光技术(IFA)、聚合酶链式反应(PCR)等虽然具有敏感性高、特异性强的特点,但一般只适应于实验室诊断或研究应用,而不适用于生产。为了建立一种猪旋毛虫病快速诊断方法,我们利用免疫层析原理和胶体金标记技术设计并成功制备了具有特异、敏感、快速、方便、安全等特点的猪旋毛虫病快速诊断试纸条。用人工诱导腹水法,将杂交瘤细胞(T.S.-F41)经腹腔注射于5只预先注射无菌石腊油的Balb/C小鼠体内,7天后开始收集腹水,共收集55mL。用饱和硫酸铵沉淀法纯化所收集腹水,得到纯化单克隆抗体,其蛋白含量为8.360mg/mL,用间接ELISA法测得该单克隆抗体效价为1:102400。用胶体金标记技术,将直径为15nm的胶体金颗粒分别标记抗旋毛虫ES抗原单克隆抗体和旋毛虫人工ES抗原,分别制成检测抗体和ES抗原的猪旋毛虫病快速诊断试纸条。用该试纸分别检测猪旋毛虫病阳性样品,囊虫病、住肉孢子虫病、肺丝虫病、蛔虫病、弓形虫病阳性样品,及健康猪阴性样品,结果试纸条检测旋毛虫病阳性病样品的阳性数与临床结果完全一致,而检测<WP=6>其它寄生虫病阳性样品均为阴性,健康猪阴性样品有2份出现假阳性结果,假阳性率为1.3%(2/150)。用检测抗体试纸条检测5份旋毛虫病阳性血清中抗体效价,其检测结果与ELISA检测结果完全一致或低1~2个滴度。表明该试纸条具有很高的敏感性和特异性。用该试纸条对河南省南阳、许昌、驻马店、平顶山四市12563头出栏猪进行旋毛虫病临床检测,分别用压片镜检法、消化法、ELISA法作对照。结果检测出阳性率分别为:1.03%(129/12563)、0.75%(94/12563)、0.99%(124/12563)和1.03(129/12563)。表明快速诊断试纸条法检出率较消化法高,与ELISA法检测结果完全一致。压片镜检法检出率最低,相当于消化法的75%。我国养猪业正迅猛发展,人们对猪肉及肉制品的质量要求也越来越高。因此,对旋毛虫病的检疫需要有一种更快速和更科学的手段。该试纸条可以作为新型、可靠的猪旋毛虫病检疫手段,在旋毛虫控制、提高肉食品的质量、维护人类身体健康等方面将会发挥重要作用,并具有极其广阔的市场。
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