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鸭细小病毒可引发鸭短喙-侏儒综合征,病鸭表现为喙萎缩变形、舌头外伸和生长发育迟缓。2014年底我国首次有该病发生与报道,对我国肉鸭养殖业造成了严重损失。目前,鸭细小病毒尚无商品化的抗体检测试剂盒和卵黄抗体制剂。基于此,本研究拟建立鸭细小病毒抗体ELISA检测方法,制备鸭细小病毒精制卵黄抗体。首先,利用特异性引物扩增鸭细小病毒VP2基因,将其插入pET-32a(+)载体以构建原核表达系统,并优化条件进行表达。结果表明,重组VP2蛋白位于包涵体中,大小为49 kDa,最优IPTG诱导浓度为1.0 mmol/L。Western-bloting结果表明该重组蛋白对抗体血清具有特异性。然后,以该蛋白建立抗体ELISA检测方法并进行检验。结果表明,本试验建立的ELISA方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,可应用于鸭细小病毒抗体检测。其次,选用鸭细小病毒疫苗免疫产蛋鸡,制备了卵黄抗体;采用三种不同方法纯化了鸭细小病毒卵黄抗体,并对其进行了常规检验。结果表明,疫苗所用种毒EID50为10-4.84/0.2 mL,疫苗的剂型、粘度、稳定性和安全性检验全部合格。卵黄抗体的常规检验结果显示,水稀释-硫酸铵二次沉淀法的纯化效果较好。三种方法制备出的卵黄抗体都比较纯净,水稀释-硫酸铵二次沉淀法浓度为3.837 mg/mL,辛酸法浓度为3.422 mg/mL,氯仿法浓度为4.512 mg/mL,颜色和透明度分别为澄清透明、浅白色半透明和浅黄色透明。之后,对制备的卵黄抗体进行了 SDS-PAGE和Western-bloting鉴定。结果显示卵黄抗体有两条链,大小分别为65 kDa和33 kDa,可特异性结合鸭细小病毒的VP3蛋白,具有良好的反应原性。利用先前建立的抗体ELISA检测方法测定制备的卵黄抗体的效价。结果显示,水稀释-硫酸铵二次沉淀法制备的卵黄抗体效价最高,为1:12800;辛酸法和氯仿法的效价略低,为1:6400。最后,进行攻毒保护试验测定卵黄抗体的保护率。结果表明,攻毒组的感染率为100%,且喙长和体重增长受到了明显阻碍,符合发病特征。而保护组感染率为10%,卵黄抗体对易感鸭的保护率达到了 90%,可有效防止鸭细小病毒感染。本研究成功建立了一种能特异性检测鸭细小病毒抗体的ELISA方法,并制备了鸭细小病毒卵黄抗体,同时对卵黄抗体的效果进行了评定。本研究的结果为鸭细小病毒感染的快速检测和科学防治提供了有效手段,同时对卵黄抗体的大规模制备与应用具有重要意义。