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研究背景：前列腺癌（prostate cancer, PCa）持续增长的发病率和持续增加的死亡率是目前非常重要的一个公众问题。目前治疗PCa的方法包括外科手术、放射治疗和内分泌治疗等。但是这些方法对激素非依赖PCa治疗效果不够理想。基因治疗是目前有可能治愈肿瘤的一种方法。本实验构建肿瘤血管内皮抑素功能片段（Tum5）和自杀基因（TK）非融合重组腺病毒相关病毒（adeno-associated virus, AAV），AAV感染PCa细胞后持续地表达、分泌Tum5蛋白，阻止肿瘤内部新生血管形成，双靶位治疗PCa。目的：1.构建pAAV-TK、pAAV-Tum5、pAAV-TK-IRES-Tum5、pAAV-Tum5-IRES-TK质粒。2.rAAV-TK、rAAV-Tum5、rAAV-TK-IRES-Tum5、rAAV-Tum5-IRES-TK病毒颗粒的包装、浓缩、纯化与鉴定。3.基因重组腺相关病毒rAAV-TK、rAAV-Tum5、rAAV-TK-IRES-Tum5、rAAV-Tum5-IRES-TK的体外功能实验。方法：1.通过基因重组技术将Tum5和HSV-TK基因克隆入pIRES-MCS的不同位点，构建pAAV-TK、pAAV-Tum5、pAAV-TK-IRES-Tum5、pAAV-Tum5-IRES-TK质粒，通过酶切鉴定载体质粒正确。2.采用HEK293细胞包装病毒AAV Help free系统转染；采用氯仿-PEG/NaCl-氯仿抽提分离、浓缩和纯化病毒。3.培养人前列腺癌细胞（PC3）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC），通过荧光显微镜、实时定量PCR、Western blot检测病毒感染效率，通过倒置显微镜观察细胞生长状况，通过流式细胞仪和MTT法观察细胞的凋亡情况和细胞周期变化。结果：1.成功构建pAAV-TK、pAAV-Tum5、pAAV-TK-IRES-Tum5、pAAV-Tum5-IRES-TK质粒。成功得到浓缩的重组腺相关病毒rAAV-Tum5、 rAAV-TK、rAAV-Tum5-IRES-TK、rAAV-TK-IRES-Tum5。2.rAAV-Tum5、rAAV-TK、rAAV-Tum5-IRES-TK、rAAV-TK-IRES-Tum5均能够顺利感染PC3及HUVEC细胞，并能够表达目的蛋白，Tum5蛋白能够抑制HUVEC的成管能力，促进HUVEC凋亡，转染TK基因的PC3细胞凋亡细胞比例要远大于对照组。结论：所构建的AAV-TK-IRES-Tum5重组腺相关病毒可以感染PC3及HUVEC细胞并能够表达目的蛋白。Tum5蛋白抑制了HUVEC的成管能力并促进凋亡，TK基因促进了PC3细胞的凋亡，为进一步的体内实验奠定基础。