目的：随着人们生活水平的提高，糖尿病（diabetes mellitus,DM）的发病率逐年上升，由糖尿病导致的骨质疏松（osteoporosis,OP）也随之增加。糖尿病状态下存在骨代谢异常，许多研究表明，1型糖尿病与骨量减少有密切关系。骨质疏松是以骨量减少，骨组织微观结构退变为特征，以致骨脆性增高而骨折危险性增加的一种全身性疾病。目前，糖尿病并发骨质疏松的发病机制还不十分清除，可能与胰岛素不足所致的持续高血糖状态，血浆1,25-(OH)2D3水平下降，Ca、P代谢障碍，继发性PTH分泌增加等诸多因素有关。骨质疏松时骨吸收大于骨形成，因而导致骨量减少。在骨质疏松的发病过程中破骨细胞（osteoclast,OC）起着极其重要的作用。由于目前尚无可利用的破骨细胞株，所以人们尝试用体外培养破骨细胞样细胞（osteoclast-like cell,OLC）的方法来研究破骨细胞的行为和功能。本研究在建立1型糖尿病骨质疏松大鼠模型的基础上，通过体外破骨细胞培养，观察破骨细胞对1型糖尿病大鼠骨质疏松形成的影响，进一步研究第三代二膦酸盐类药物阿仑膦酸钠（alendronate,固邦）对体外破骨细胞的作用，从细胞水平探讨1型糖尿病骨质疏松的发病机制。方法：雌性Wistar大鼠60只，2.5-3月龄，随机分为正常对照组（NC组）、正常假手术组（NS组）、正常双侧卵巢切除<WP=4>组（NOVX组），每组各8只；1型糖尿病对照组（DC组）、1型糖尿病假手术组（DS组）、1型糖尿病双侧卵巢切除组（DOVX组），每组各12只。组间大鼠体重无统计学差异。1型糖尿病模型建立： 2%链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）溶液（用柠檬酸钠缓冲液配制，PH=4.5，浓度为0.1mmol/L），按60mg/kg单剂量行腹腔注射，48小时后血糖≥16.7mmol/L视为制模成功。骨质疏松大鼠模型建立：大鼠麻醉后，在无菌条件下切除双侧卵巢。假手术组大鼠只作背部切口及缝合处理，不作卵巢切除。实验期间所用大鼠均自由进食水。手术当天正常组与糖尿病组各取1只大鼠进行体外骨髓破骨细胞培养，作为基值。第2、4、8周末各组大鼠测体重、血糖，并随机选择1只拉颈处死大鼠。体外骨髓破骨细胞培养：用75%乙醇浸泡大鼠10-15分钟。无菌条件下取股骨，分离周围组织，切断股骨两段骨骺，用含4ml α-MEM的25G针头冲洗骨髓腔2次，无菌离心管收集骨髓冲洗液，离心；α-MEM稀释细胞至1.5×106/ml的浓度，将此细胞悬液置于24孔培养板内培养，0.5ml/孔，培养液为无酚红αMEM，其中含10%胎牛血清、30ng/ml sRANKL、10ng/ml M-CSF、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素；每2-3天更换培养液，置于5%CO2 和37℃培养箱内培养。阿仑膦酸钠干预组（BP组）：在骨髓细胞培养基内加入10-7mol/L 的阿仑膦酸钠。破骨细胞染色和计数：细胞培养7天后，细胞固定和抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP）染色，TRAP染色阳性且细胞核≥3个认定为OLC，倒置显微镜下计数每孔OLC数。所有实验数据采用均数±标准差（±SD）表示，应用配对t检验、单因素方差分析及相关分析，在SPSS10.0统计<WP=5>分析软件上进行。结果：实验期间，1型糖尿病大鼠组血糖均明显高于正常组(p<0.01)，糖尿病大鼠各组间无差异(p>.05)。与正常组大鼠相比，糖尿病各组大鼠体重在各个时期均明显降低(p<0.01)；NOVX组与DOVX组体重分别高于同期NC组、NS组和DC组、DS组，第八周实验结束时，NOVX组(282.00±21.49)与DOVX组(200.00±10.32)体重明显高于NC组(239.60±10.11,p<0.01)、NS组(241.67±12.86,p<0.01)和DC组(171.33±10.44,p<0.01)、DS组(170.40±9.84,p<0.01)。在8周的实验中，正常组和1型糖尿病组大鼠体外培养的OLC随时间延长而增加；与对应的正常组相比，1型糖尿病组OLC增加；不同时间，NOVX组和DOVX组OLC数量均分别高于NC组、NS组和DC组、DS组(p<0.01)；NC组与NS组之间，DC组与DS组之间无显著性差异(p>.05)；在所有组中，阿仑膦酸钠均能使OLC显著减少(p<0.01)。OLC数量与1型糖尿病病程(r=0.737；p=0.015)和去卵巢时间呈正相关(r=0.837；p=0.019)与血糖无关(r=-0.537；p=0.109)。结论：本研究在国内首次建立了正常和1型糖尿病骨质疏松大鼠体外骨髓破骨细胞培养方法。该培养方法稳定，有效，具有可重复性，分离培养的破骨细胞有多核，TRAP阳性的特性。本研究结果显示，1型糖尿病和切除卵巢均促进骨髓诱导的破骨细胞的形成，破骨细胞数量增加可能是1型糖尿病骨质疏松大鼠骨量丢失的原因之一；在不同时间，阿仑膦酸钠均能显著抑制1型糖尿病骨质疏松大鼠体外培养的破骨细胞的形成。 <WP=6>