【摘 要】
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胡杨是典型的耐盐抗旱植物,长期生长在盐渍化和干旱的土壤中,形成了很强的适应能力,是在荒漠、半荒漠地区唯一可以成林的乔木树种.为了研究和利用胡杨丰富的抗逆基因资源,我
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胡杨是典型的耐盐抗旱植物,长期生长在盐渍化和干旱的土壤中,形成了很强的适应能力,是在荒漠、半荒漠地区唯一可以成林的乔木树种.为了研究和利用胡杨丰富的抗逆基因资源,我们从胡杨二年生苗中以RT-PCR方法克隆得到一个锌指蛋白基因,全长924bp,含有一个典型的C<,2>H<,2>锌指结构和一个富含G的DNA结合域,一个完整的ORF读码框,编码218个氨基酸.与拟南芥和甜菜线粒体基因组中细胞色素C氧化酶基因、与月见草中ABC型血红素转运蛋白基因都有较高的同源性.为确定该锌指蛋白基因是否与胡杨的耐盐性相关,用0.7%NaCl溶液处理胡杨二年生苗3、5、7、8、9、11天,提取叶片总RNA做Northern杂交,分析显示该基因的表达量随着盐处理天数的增加而增加,表明克隆得到的该基因是与胡杨耐盐性相关的.在初步了解其功能后,以p构建植物表达载体,农杆菌GV3101介导转化烟草,抗生素筛选后做PCR检测和Southern杂交检测,鉴定出转基因植株.用0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1.0%、1.2%、1.4%、1.6%、1.9%、2.0%的NaCl浓度梯度溶液处理转基因烟草,提取总RNA做Northern杂交,检测该基因在转基因烟草中的表达情况.分析该基因在转基因烟草中改变烟草耐盐性的能力以确定其功能.胡杨在受到盐胁迫时进行区域化作用是胡杨耐盐的主要生理机制,主要由液泡膜上质子泵、Na+/H+逆向转运蛋白和离子通道调控的,这说明此锌指蛋白可能的调控机制是通过提高与能量代谢有关的酶的基因表达量来提高胡杨的耐盐性的.并且胡杨细胞在受到盐胁迫时其线粒体和质体的含量显著增加,这也说明胡杨通过调节其能量代谢来调节其耐盐能力是一条很重要的途径.
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