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目的：构建含有乳腺癌特异性转导小肽PI与增强型绿色荧光蛋白EGFP融合基因片段的重组原核表达载体；分离纯化得到乳腺癌特异性转导小肽PI-EGFP融合蛋白；检测其与乳腺癌MDA-MB-231细胞的亲和特异性；制备乳腺癌裸鼠模型；经尾静脉及局部注射后初步观察其在荷瘤裸鼠体内的分布,为该小肽今后作为靶向性载体应用于体内研究奠定实验基础。方法：合成PI的DNA序列,将其定向插入到p EGFPN2中,经酶切获取PI-EGFP的核苷酸序列,再将PI-EGFP融合基因片段克隆入原核表达质粒pET-28a(+)中,构建出pET-28a (+)-PI-EGFP的重组的原核表达载体；重组子经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导表达,利用表达蛋白N端的组氨酸“标签”(His-tag)进行分离纯化,12%的SDS-PAGE凝胶电泳分析纯化蛋白,Western blot免疫印迹鉴定纯化蛋白；荧光显微镜下观察纯化蛋白的发光活性；将纯化的目的蛋白与MDA-MB-231细胞进行共培养,检测它与细胞的结合能力；荷瘤裸鼠经尾静脉和肿瘤局部注射融合蛋白,观察其在荷瘤裸鼠体内的分布。结果：重组载体pET-28a (+)-PI-EGFP经测序鉴定,构建成功；经IPTG诱导,确定其最佳诱导时间为2小时,最佳诱导温度为37℃,IPTG诱导的最佳浓度为1mmol/L,表达产物以可溶性形式存在,并经SDS-PAGE分析显示,其相对分子量约33kD,与理论值相符；利用HisTALONTM纯化柱对诱导后细菌沉淀进行纯化后,12%的SDS-PAGE凝胶电泳显示在相对分子量约33kD处有单一的条带,与理论值相符,后经Western Blot鉴定显示为目的蛋白；在490nm波长光线激发下,荧光显微镜下观察目的蛋白呈绿色；纯化的目的蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,可在细胞内观察到绿色荧光；经尾静脉注射融合蛋白后,在各个组织器官未能观察到绿色荧光,但在肿瘤局部注射时,可见到明显的绿色荧光。结论：成功构建了乳腺癌特异性转导小肽PI与增强型绿色荧光蛋白EGFP融合基因片段的重组原核表达载体；成功诱导表达了含有PI-EGFP的融合蛋白并分离纯化得到纯度较高的目的蛋白；乳腺癌特异性靶向多肽PI能够成功的将EGFP转导入细胞内,表明其在融合蛋白中的细胞靶向性功能稳定,并能在荷瘤裸鼠体内观察到绿色荧光,提示其可作为稳定的外源性蛋白质载体；可用于将后来小肽体内分布情况及转导性的研究,同时为其跨膜转导机制的研究奠定了实验基础。