【摘 要】
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目的:以复制缺陷的腺病毒为载体,细菌内同源重组法构建载有npcl基因的腺病毒载体并初步鉴定.以用于Niemann Picks type c的基因治疗.方法:利用限制内切酶kpn1及HindⅢ从带有
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目的:以复制缺陷的腺病毒为载体,细菌内同源重组法构建载有npcl基因的腺病毒载体并初步鉴定.以用于Niemann Picks type c的基因治疗.方法:利用限制内切酶kpn1及HindⅢ从带有朊病毒启动子的质粒Prp-pro-mnpc1中切下目的的基因npc-1,克隆至空梭质粒Padtrack-CMV,再与Padeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,经抗性筛选和酶切鉴定的质粒利用脂制体转染人293细胞中扩增,利用Adeasy-1系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒重组的结果,并用RT-PCR法鉴定目的基因的表达.结论:①利用腺病毒载体系统Adeasy-1可构建能成功表达npcl基因的腺病毒载体,为对Niemann picks病C型的进一步研究提供了条件,但有效性需进一步通过体外试验证实;②构建过程仍然存在连接及重组过程中的低效问题,技术细节有待改进.
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