【摘 要】
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本实验意在摸索人工构建受多种胁迫强诱导的启动子。本实验从已发表的论文中获得了rd29A、erd1、cor15a、lti30、kin1五个胁迫诱导基因的启动子序列，这五个启动子均受多种
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本实验意在摸索人工构建受多种胁迫强诱导的启动子。本实验从已发表的论文中获得了rd29A、erd1、cor15a、lti30、kin1五个胁迫诱导基因的启动子序列，这五个启动子均受多种胁迫诱导，它们均含有多个胁迫应答元件。本实验用PCR方法从这五个胁迫诱导启动子上分别获取了它们的关键片段，由于rd29A启动子是目前常用的诱导活性较高的启动子，本实验以rd29A启动子上的关键片段到其ATG后15bp的269bp片段MP为基础，在其5端依次连接其它关键片段的单体或二聚体，构建了六条人工嵌合启动子，分别为erd1+kin1+cor15a+MP、lti30+erd1+kin1+cor15a+MP、erd1+kin1+cor15a+lti30+MP、erd1+kin1+cor15a+rd29A+MP、erd1+cor15a+cor15a+rd29A+MP、erd1+erd1+cor15a+rd29A+MP。又克隆了rd29A全长启动子作为对照。选用pBI121作为植物表达载体，该载体上有由CaMV35S启动子调控的Gus基因。将这六条人工构建的嵌合启动子和rd29A全长启动子分别取代pBI121上的CaMV35S启动子，使它们控制位于其后的Gus基因的表达。pBI121载体和重组表达载体分别导入农杆菌GV3101，转化拟南芥愈伤组织，冷处理后瞬时表达分析表明这些重组启动子均具有诱导活性。这些载体导入农杆菌LBA4404后，叶圆盘法转化烟草，PCR鉴定烟草转化株。下一步将用高盐、干旱、低温和ABA处理分别处理这些烟草转化株，GUS活性定量分析鉴定各个启动子的诱导活性。
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