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参环毛蚓（Pheretima aspergillum）,习称“广地龙”,是我国传统的动物类中药材。我国的蚯蚓品种较多,很多品种形态高度相似,这也加大了混淆品进入市场的概率,正伪品分辨难度随之增加,同时广地龙商品质量受到影响,重金属超标现象严重。本研究建立起广地龙的分子鉴定技术,并探讨了重金属镉、铅胁迫对广地龙的影响,有利于提高广地龙的药材质量,同时为减少或改善广地龙对重金属的富集提供理论基础。1.建立起3种分子鉴定技术,用于广地龙与其混淆品的鉴别:第一种鉴定方法为RAPD技术,筛选出3条引物可作为广地龙与其混淆品的鉴别引物,分别为:引物DL05（5’-CATCCCCCTG-3’）、引物DL12（5’-TGAGCCTCAC-3’）、引物DL18（5’-TTCCGAACCC-3’）;优化RAPD反应体系,得到最佳的反应条件:Mg2+浓度为1.0mmol/L,dNTPs浓度为0.2 mmol/L,引物浓度为0.3μmol/L,Taq DNA聚合酶浓度为1.5 U。第二种鉴定方法为RFLP技术,利用限制性内切酶Rsa I对广地龙及混淆品的CO I片段进行酶切,分析结果为:广地龙的CO I片段经酶切后得到3个片段,赤子爱胜蚓酶、暗孔远盲蚓及威廉环毛蚓的CO I片段经酶切后均得到2个片段,而大腔蚓CO I片段中没有Rsa I酶的识别位点,根据酶切后的片段大小及数目可将广地龙与其混淆品种分开。第三种鉴定方法为LAMP技术,利用LAMP引物设计软件设计出4组引物,分别为FIP（CAACAGCCGCAGACCTTACTA-AACATAAGATTTTGACTTTTGCC）,BIP（GGACAGTTTACCCCC CTTTAGC-GCTAAATGTAGTGAGAAAATTGCA）,F3（CATAGC ATTCCCACGTCTA）和B3（ACCTAAAATTGATGAGGCAC）,通过LAMP反应可将广地龙与其混淆品分开。优化LAMP反应体系,得到最佳的反应温度为63°C,最佳的反应时间为60分钟,LAMP反应检出限是常规PCR的1000倍。2.探索广地龙对镉、铅的富集特征,同时研究镉、铅胁迫下对广地龙药效成分蚓激酶活性和次黄嘌呤含量的影响:广地龙对镉和铅都有一定的耐受和富集能力。镉胁迫下,随着镉胁迫浓度的增加广地龙体内镉富集量总体呈增加的趋势,其对镉的富集没有呈现特定的时间规律,而是当镉累积量达到一定量时,将进行向外排出而减少体内重金属含量,之后继续吸收累积的过程;铅胁迫下,随着铅胁迫浓度的增加广地龙体内铅富集量总体呈增加的趋势,不同浓度铅胁迫下,5周内广地龙对铅的富集特征相同,均表现为先吸收再排出后吸收。广地龙体内的蚓激酶活性变化与胁迫浓度和时间有密切关系。单一镉胁迫下,与对照组比较,广地龙体内的蚓激酶活性变化规律为先增高后下降,且胁迫浓度越大酶活性下降幅度越大;单一铅胁迫下,与对照组比较,低浓度胁迫蚓激酶变化规律为先增高后下降,而高浓度胁迫蚓激酶变化规律为连续下降;镉与铅复合胁迫下,与对照组比较,蚓激酶活性变化规律为先下降再增高后下降。广地龙体内的次黄嘌呤含量变化与胁迫浓度和时间有密切关系。单一镉胁迫下,与对照组比较,广地龙体内的次黄嘌呤的含量变化规律为先下降再升高后下降,不同浓度胁迫对次黄嘌呤的含量没有明显的变化规律;单一铅胁迫下,与对照组比较,次黄嘌呤的含量变化规律为先升高后下降;镉与铅复合胁迫下,与对照组比较,低、中浓度复合胁迫下次黄嘌呤含量变化规律为先下降、再升高、下降、后升高,而高浓度复合胁迫下次黄嘌呤含量变化规律为先下降再升高后下降。