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目的:肺癌是全世界死亡率最高的恶性肿瘤。根据病理组织学分型,肺癌主要包括小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC),其中NSCLC约占80%。近年来,尽管化疗及靶向治疗在NSCLC取得了较大进展,但是仍未显著改善患者的预后。研究表明肿瘤的早期诊断是提高患者生存率的有效方法。目前,影像学是筛查NSCLC的主要手段,但是其假阳性率高,而现有的血液学肿瘤标志物缺乏较高的诊断敏感性和特异性。因此,亟需寻求更高效的NSCLC诊断标志物。外泌体是细胞主动分泌的具有双层脂质结构的囊泡,携带了蛋白质、核酸等生物活性物质,广泛分布在血液等体液中。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的转录本,在NSCLC的发生发展中发挥重要作用。最近研究证实,肿瘤细胞内的lncRNAs可被包裹进外泌体,外泌体lncRNAs可作为多种肿瘤的新型生物标志物。然而,外泌体lncRNAs在NSCLC中的表达及其临床意义尚未完全阐明。因此,本课题主要观察NSCLC患者血清外泌体lncRNAs表达水平,并探讨外泌体lncRNAs对NSCLC的诊断价值。方法:采用基于聚乙二醇沉淀法的试剂盒提取NSCLC患者及健康对照血清样本中的外泌体,通过透射电子显微镜(Transmission electron microscopy,TEM)、纳米颗粒追踪分析技术(Nanoparticle tracking analysis,NTA)和免疫印迹技术(Western blot,WB)分析鉴定外泌体形态、粒径分布特征和表面蛋白标志物。通过查阅文献,选取在NSCLC组织中高表达的lncRNAs作为候选分子。将NSCLC患者及健康对照随机分为训练集(50例NSCLC患者和50例健康对照)和验证集(100例NSCLC患者和100例健康对照),收集血清样本并提取外泌体。采用qRT-PCR检测训练集中患者和健康对照血清外泌体中候选lncRNAs的表达水平,筛选出在NSCLC患者中高表达的外泌体lncRNAs,并进一步在验证集中验证其表达水平。采用卡方检验和Fisher确切概率法分析外泌体lncRNAs表达水平与NSCLC患者临床特征的相关性。观察RNase处理及长时间室温孵育外泌体后lncRNAs的水平变化。采用化学发光法检测受试者血清细胞角蛋白19片段(Cytokeratin 19fragment,Cyfra21-1)的浓度。最后,通过ROC曲线分析外泌体lncRNAs单独及联合Cyfra21-1对NSCLC的诊断效能。结果:提取NSCLC患者血清外泌体,TEM观察到外泌体的双层膜结构,NTA检测其粒径主要分布在100 nm左右,WB检测到外泌体蛋白标志物CD9和CD63的表达。通过查阅文献,共选取了9条lncRNAs作为候选分子。采用qRT-PCR检测训练集和验证集两组独立样本中lncRNAs表达水平,结果发现TBILA、AGAP2-AS1和SOX2OT在NSCLC患者血清外泌体中显著升高。进一步研究发现TBILA表达水平与肿瘤大小呈正相关、AGAP2-AS1表达水平与淋巴结转移及TNM(Tumor-Node-Metastasis)分期呈正相关、而SOX2OT表达与患者临床特征未见显著相关性。此外,RNase处理及长时间室温孵育并未显著降低外泌体TBILA和AGAP2-AS1的水平。ROC曲线分析发现,TBILA或AGAP2-AS1对早期NSCLC和不同亚型NSCLC均展现出良好的诊断效能,而TBILA联合AGAP2-AS1并未展现出更好的诊断效能。但是,外泌体lncRNAs联合NSCLC血清蛋白标志物Cyfra21-1可提高NSCLC的诊断效能。结论:外泌体TBILA和AGAP2-AS1在NSCLC患者血清中高表达。外泌体TBILA和AGAP2-AS1对NSCLC具有较高的诊断价值。外泌体lncRNAs(TBILA和AGAP2-AS1)联合Cyfra21-1可提高NSCLC的诊断效能。