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研究目的：Dab2是是一种多能能的衔接蛋蛋白，在人人类多种肿肿瘤中呈现表达缺缺失/下调调的状态，对肿瘤瘤细胞功能能有着广泛泛的影响。本研究着着眼于Daab2在乳乳腺癌中的表达缺缺失/下调与与乳腺癌细细胞生物学学功能方方面的关系系，分析析肿瘤相关关基因Daab2在乳腺腺癌发生、、发展中的的作用，重重点探讨Dab2对于于细胞TGGF‐β受体体内吞循环环的影响，以及由此此对免疫细细胞的功能能抑制，，从而全面面阐述Daab2对乳腺腺癌发生的意义。研究方法法：1）收集上上海仁济济医院2011年1月‐2011年11月间的的乳腺癌病病例组织织标本存档档蜡块766例，通过过免疫组化（IHC）检测Dab2在乳腺腺癌标本本中的表达情况，并和正常常乳腺组织织中的表达情况做做比对，分分析Dabb2表达与与乳腺癌各各临床病理理特点间的的关系。2）Western‐Blot法法分析常见见乳腺癌细胞株的Dab2蛋白表达情况，并通通过Dab22质粒转染染使SK‐BRR‐3细胞株株重新表达达Dab2(SK‐BR‐3Daab2)，与空空载体转染染SK‐BR‐3细胞(SSK‐BR‐3V)比较，观察察Dab2对对细胞增殖殖、迁移移、侵袭能能力的影响响，以及MMAPK信号号通路蛋白白磷酸化水水平的变化。3）利用用稳转了PPAI‐1启动动子和萤火火虫荧光素素酶报告基基因的MMLEC细胞胞（水貂肺肺上皮细胞胞）检测乳乳腺癌细胞胞培养上上清中活性性TGF‐β的的浓度，，观察再表表达Dab22对于SKK‐BR‐3细胞胞株TGF‐β清除能能力的影响响,以及对对于经典Smad信号号通路的影响。4）收集集转染后的的SK‐BR‐3Dab2细细胞与对照照组SK‐BRR‐3V细胞胞的TGFF‐β刺激培培养上清，利用共培养系统统体外模拟拟肿瘤微环环境，观察察上清中中TGF‐β浓浓度差异异在Treg诱诱导分化上上的不同效效果，并进进一步用CCFSE检测测Treg对T细胞增增殖的抑制制能力。研究结果果：1）76例例原发性乳乳腺癌患者者标本中，仅有188例Dab22呈免疫组组化阳性性染色（224%），其其余58例例乳腺癌标标本Dab2蛋白均呈呈阴性状态态，包括括导管原位位癌伴微微浸润的标标本也呈现现缺失表达达，而100例正常乳乳腺组织织、1例乳乳腺囊肿标标本的Dabb2免疫组组化结果均均呈胞浆强强阳性染色色。Dabb2蛋白表表达情况和和年龄、肿肿瘤大小、淋巴结结转移情况况、疾病分分期这些些临床特点点均无显显著相关性性，P>0.055。2）乳乳腺细胞株株western blot检测测结果显示示，正常乳乳腺上皮细细胞MCCF‐10A显示示有分子子量为105kDa的Daab2表达，，而MDAA‐MB‐231和SK‐BR‐3细胞胞内源性DDab2仅有有微弱的表表达，MCFF‐7细胞则则完全检测测不到。。SK‐BR‐3Dab2细胞胞与对照组SK‐BR‐3V相比，，72小时时后细胞增增殖的抑抑制率达到到了31%%。SK‐BR‐3Dab2迁迁移穿越corning小室微孔膜膜的细胞胞数量明显显少于对对照组SK‐BBR‐3V（PP<0.05,抑制制率达到32%），在在浓度5ng/ml TGGF‐β的刺刺激下，DDab2依旧表现出对对迁移能力力的抑制作作用（PP<0.05，抑抑制率达到到37%）。侵袭实验验中SK‐BRR‐3Dab2穿越微孔孔膜的细细胞数量同样明显显少于对照照组（P<0..05，抑制制率达到778%），即即使有TGF‐β的刺激，抑抑制作用同同样明显（P<0.05，抑制率达达到63%））。血清清刺激后SK‐BR‐3DDab2细胞胞c‐FOS的的表达明显显较对照组组减弱，而而p‐EERK活性基基本一致。。3）SK‐BBR‐3细胞一一定程度上保留了了具有功能能的TGF‐ββ受体，并并且能够够感受和下下传信号号。当细胞胞培养上清清中的TGFF‐β初始浓浓度为600pM时，，在4小时后，SKK‐BR‐3Dabb2比对照照组SK‐BRR‐3V浓度度降低12ppM，显示示出清除能能力的增强。SK‐BBR‐3Dab22细胞和SSK‐BR‐3V细胞在TTGF‐β刺刺激0.5小时后，前者的p‐Samd2表达明显显减弱，但但之后两组组的Smad2磷酸化化都维持持在相似的的水平。Tfnn内吞循环环实验显示表达Dab2的SK‐BR‐3DDab2细胞胞Rab11依依赖的内吞吞循环途径径上的阻碍碍得到改善，15分钟时均均匀染色的的细胞比对对照组多出出55%。4）利用共培养系系统观察SSK‐BR‐3Daab2细胞与与对照组SK‐BR‐3V的TGF‐β刺激激培养上清清在Treg转转化诱导上的差异异，SK‐BR‐3Dab2培培养上清清孵育CDD4+CD25‐的na ve T细胞后CCD4+CD255+T细胞中中Foxp3表表达率为为25.8±1.65%，而而对照组的的Foxp3表表达率为118.4±5.5%%（P<0.05）。CFSSE增殖抑抑制实验进进一步证实实了所诱导导转化的Treg具有有抑制T细细胞增殖殖的功能。结论：Dab2在在乳腺癌中中呈现表达达缺失，这这不仅使细细胞丧失了了Dab2对对细胞增增殖、迁移移和侵袭的明显抑制作用，同时还影影响了细胞胞内吞循环环中的Rab11依依赖途径，使得TGGF‐β受体体的循环利利用发生障障碍，细胞胞对TGFF‐β的清除除率下降，这会加重重肿瘤微微环境中TGF‐β的蓄蓄积，继而而促进na ve CD44+T细胞向向Treg分分化，后者者能够抑制制免疫细胞胞的功能。。乳腺癌癌细胞中Dab2的缺缺失可以造造成肿瘤微环境中中的免疫抑抑制而促进进肿瘤进进展。