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口蹄疫（Food-and-Mouth disease，FMD）是世界性重大动物疫病之一，被世界动物卫生组织和我国政府列为A类和一类传染病之首。为了给FMD的防控提供更安全、高效的防控产品，本研究通过细菌内同源重组法将Asia-Ⅰ型FMDVP1-ZA，3CD基因以及白介素基因（IL-18）与复制缺陷型人5型腺病毒载体重组，成功构建了重组腺病毒载体。为Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒腺病毒活载体疫苗的研究积累了基础数据。 1) 克隆了Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒P1-2A和3CD基因。序列测定表明：P1-2A长2247bp，编码749个氨基酸：3CD长2052bp包括终止子TAA，共编码683个氨基酸。经与其它Asia-Ⅰ型FMDV株进行比对，该毒株与IND01和云南宝山毒株的序列同源性相对较高，P1-2A基因核苷酸序列同源性分别为92.5％和84.9％，与IND01毒株属于同一基因亚型。 2) 将目的基因和穿梭载体用相应的内切酶酶切后连接，将阳性的重组腺病毒穿梭质粒用PmeⅠ单酶切线性化后与腺病毒骨架载体在BJ5183细胞中进行同源重组，将鉴定为阳性的重组腺病毒质粒转化DH5a感受态菌用于扩增，用于转化293细胞包装成熟重组腺病毒。正确的重组有二种方式即左右臂之间同源重组和起始点与右臂同源重组，酶切可以切出35Kb的人片段和3.0Kb或4.5Kb的小片段。本实验中切出35Kb、和4.5Kb的条带，为起始点与右臂同源重组。 3) 用线性化的重组腺病毒转染293细胞，获得基因组结构均一的重组腺病毒。将鉴定阳性的重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化借助脂质体转染至293细胞，7天左右包装成成熟的重组腺病毒。用此重组腺病毒再次感染293细胞，2-3天后可见细胞病变（CPE），病变细胞涨大变圆、聚集，产生典型的腺病毒葡萄样病变。测定第10代重组腺病毒的毒价为106.61TCID50／0.1ml 4) 将重组腺病毒在豚鼠中进行了初步免疫效力试验。将传代稳定，毒价高的重组腺病毒处理后用于免疫豚鼠，定期采血，用间接ELISA法测定血清抗体，结果表明在豚鼠体内有FMDV抗体产生，但滴度不是很高，用同型口蹄疫病毒攻击作保护性实验，结果重组腺病毒免疫组的3只豚鼠中有2只得到了完全保护。