【摘 要】
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目的:探索KOA湿热证潜在生物标志物,并初步研究四妙散的干预作用。方法:（1）在中国知网、万方医学网、维普期刊、Pub Med中以“动物模型”、“湿热”检索从2000年1月至2022年2月的关于湿热证动物模型研究的文献,从动物种类、干预因素、相关疾病、评价指标等几方面进行文本信息挖掘。（2）将大鼠随机分为A（假手术组）、B（KOA模型组）、C（KOA+湿热组）、D（KOA+湿热+四妙散组）、E（K
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目的:探索KOA湿热证潜在生物标志物,并初步研究四妙散的干预作用。方法:（1）在中国知网、万方医学网、维普期刊、Pub Med中以“动物模型”、“湿热”检索从2000年1月至2022年2月的关于湿热证动物模型研究的文献,从动物种类、干预因素、相关疾病、评价指标等几方面进行文本信息挖掘。（2）将大鼠随机分为A（假手术组）、B（KOA模型组）、C（KOA+湿热组）、D（KOA+湿热+四妙散组）、E（KOA+湿热+乌头汤组）五组,C、D、E组采用碘乙酸钠大鼠模型复合湿热环境制备KOA湿热证病证结合动物模型,基于以方测证思路,选用四妙散和乌头汤分别佐证与反佐KOA湿热证大鼠模型。从大鼠的一般情况、病理学检测分析及Mankin,s评分等方面验证KOA湿热证病证结合动物模型。（3）将大鼠随机分为A（假手术组）、B（KOA模型组）、C（KOA+湿热组）、D（KOA+湿热+四妙散组）四组。依据文献研究提供的湿热证模型评判指标,ELISA检测大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-17A、HSP-70、HIF-1α含量表达,肝脏NA+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶的含量;免疫组织化学法检测大鼠膝关节软骨组织HSP-70、HIF-1α的表达。探寻KOA湿热证的潜在生物标志物,初步探讨四妙散的干预作用。结果:（1）湿热证动物模型动物种以SD大鼠居多。湿热证干预因素以湿热环境最为常见,湿热环境温度使用频率最高为32℃,湿度使用频率最高为90%。湿热证动物模型研究中主要以病证结合模型为主。证候模型的研究以脾胃湿热证和温病湿热证居多;病证结合动物模型研究多为消化系统疾病、代谢性疾病。目前湿热证动物模型从行为学表现、体征、实验室指标三个部分进行评价,行为学表现是最主要的评价手段,湿热证模型与炎性指标、能量代谢指标、HSP-70、HIF-1α等密切相关。（2）C（KOA+湿热组）、D（KOA+湿热+四妙散组）、E（KOA+湿热+乌头汤组）大鼠湿热刺激后较A（假手术组）、B（KOA模型组）出现不同程度精神萎靡、喜扎堆、摄食减少、饮水量减少、被毛稀疏无光泽、大便黏腻、排便次数增加、小便黄等湿热证表现,伴随造模侧膝关节屈伸不利表现。D组四妙散灌胃后湿热证表现较C组明显改善,而E组改善不明显。Mankin’s中A组为0~1分;B、D组4~7分,为KOA早中期;C、E组为7~11分,属于KOA中晚期。B、C、D、E组Mankin’s评分与A组比较,评分显著升高（P＜0.01）;C、E组与B组Mankin’s评分比较,评分显著升高（P＜0.01）;D组Mankin’s评分显著低于C和E组（P＜0.01）。（3）与A（假手术组）比较,B（KOA模型组）、C（KOA+湿热组）、D（KOA+湿热+四妙散组）肝脏NA+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶的含量明显增高（P＜0.01）,C组较B组含量明显增高（P＜0.01）,D组经四妙散治疗后,能量代谢指标较C组明显降低（P＜0.01）。B、C、D组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-17A、HSP-70和HIF-1α的含量明显高于A组（P＜0.01）,C组TNF-α、IL-1β、IL-17A、HSP-70和HIF-1α的含量明显高于B、D组（P＜0.01）。各组膝关节均有HIF-1α、HSP-70阳性表达,A组少量HIF-1α、HSP-70表达;B组部分出现HIF-1α、HSP-70表达;C组出现大量HIF-1α、HSP-70表达;D组HIF-1α、HSP-70表达量均明显低于C组。结论:（1）湿热证动物模型干预因素众多,造模方法多样,各有其优缺点,不断细化各实验变量,建立客观、合理的湿热证模型评价体系是湿热证动物模型研究的关键环节。（2）采用膝关节腔注射碘乙酸钠复合湿热外环境刺激能构建出KOA湿热证病证结合大鼠模型,四妙散能明显改善KOA湿热证大鼠Mankin’s评分,抑制组织病理改变及软骨破坏程度。（3）KOA湿热证与炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-17A及组织HIF-1α、HSP-70上调,肝脏能量代谢指标NA+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶升高有关,可能成为KOA湿热证模型潜在标志物。四妙散干预作用可能是通过下调大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-17A、HIF-1α、HSP-70含量,降低能量代谢指标发挥作用。
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