鞘磷脂类物质不仅是真核细胞膜的重要组成部分,也是细胞与外界环境之间重要的动态调节因子。在哺乳动物中,研究表明鞘磷脂代谢物,神经酰胺(Cer),鞘氨醇(Sph),1-磷酸鞘氨醇(S1P)在细胞的生长,存活和死亡中发挥重要的调节作用。鞘氨醇激酶(SPK)磷酸化Sph显著提高细胞中SIP的水平,SIP磷酸酶和SIP裂解酶则在一定程度上降低细胞中S1P的水平。为了解S1P在植物抗逆反应中的作用,我们克隆得到水稻中编码鞘氨醇磷酸酶的基因,OsSPP1。 以水稻cDNA文库噬菌体DNA作为模板,PCR扩增得到水稻SPP基因OsSPP1全长cDNA。OsSPP1全长cDNA序列为1677bp,含有一个1248bp的开放阅读框(ORF),预测编码一个415氨基酸组成的蛋白,推测的分子量为45.6kDa,等电点为8.7。OsSPP1基因位于水稻3号染色体上,含有8个外显子和7个内含子。根据水稻OsSPP1基因氨基酸序列与人类、老鼠、酵母、真菌和植物中的SPPs家族的氨基酸序列进行比对分析,发现OsSPP1蛋白中包含一个保守的PAP2_SPPase1结构域。 为了对OsSPP1基因的生化活性和亚细胞定位有深入的认识,我们将OsSPP1编码序列克隆到原核蛋白表达载体pRSET-A中,得到重组质粒pRSETa-OsSPP1,在大肠杆菌中诱导OsSPP1重组蛋白,纯化并不顺利,目前正在进一步优化重组蛋白的诱导和纯化条件;与此同时,将OsSPP1基因的编码序列克隆到细胞定位载体GFP中,目前正在用获得的重组质粒GFP3G-OsSPP1进行OsSPP1细胞定位分析。