长非编码RNAZ38对BT549细胞干样特性影响的初步研究

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长非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)在正常发育及肿瘤发生过程中具有关键调控作用。Z38是一个新发现的 LncRNA,在乳腺肿瘤组织中表达高于癌旁组织、正常乳腺或增生乳腺,促进乳腺癌发生。本文以人乳腺癌细胞系BT549为研究材料,从Z38对 BT549细胞的 CD44+CD24-/low亚群细胞比例、微球形成能力以及多能因子表达水平的影响来探究 Z38对BT549细胞干性相关特征的影响。  本文的研究工作主要包括了以下几个方面:  1、研究 Z38对CD44+CD24-/low亚群细胞的影响:首先,通过流式细胞术分析低表达 Z38的 MCF-7、高表达 Z38的 MDA-MB-453和 BT549这三种不同乳腺癌细胞系中CD44+CD24-/low亚群细胞比例,结果显示CD44+CD24-/low比例在 MCF-7、MDA-MB-453、BT549这三种乳腺癌细胞系中有差异性。然后,通过研究 BT549细胞在普通贴壁、无血清悬浮、无血清悬浮后贴壁这三种不同的培养条件下 Z38表达水平和CD44+CD24-/low亚群细胞比例变化关系,发现无血清悬浮培养之后Z38表达水平和 CD44+CD24-/low亚群细胞比例增加,暗示 Z38和 CD44+CD24-/low亚群细胞之间存在相关性。进一步利用慢病毒Z38-shRNA感染 BT549细胞干扰其 Z38的表达,结果显示干扰Z38的 BT549细胞中CD44+CD24-/low亚群细胞比例由原来的2.52%下降至0.41%,提示,干扰Z38可能降低BT549细胞干性维持能力。  2、研究干扰Z38对 BT549细胞的微球形成能力的影响:观察 BT49细胞及干扰Z38的 BT549细胞在无血清悬浮培养时的成球状态,发现,干扰 Z38的 BT549细胞存活率降低,且微球形成能力减弱,这一结果提示干扰Z38减弱 BT549细胞的干性维持能力。  3、研究 Z38对 BT549细胞多能因子表达水平的影响:通过 RT-qPCR和蛋白质印迹实验发现,干扰 Z38的 BT549细胞中 NANOG和 SOX2的表达被下调,而OCT4的表达没有明显变化。  以上的实验结果提示,干扰 Z38降低 BT549细胞干性维持能力,这可能是通过下调多能因子SOX2和 NANOG实现的。
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