单链抗体的可溶性表达、纯化及其对表皮细胞紫外线损伤的保护作用

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谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)是生物机体内重要的抗氧化酶之一,它可消除机体内的过氧化氢及脂质过氧化物,具有较大的潜在药用价值.但由于天然GPX来源有限、稳定性差,不利于大规模制备及其应用.我室利用基因工程法成功表达了含有谷胱甘肽结合位点的单链抗体,并用化学突变法得到了含硒单链抗体酶.但由于单链抗体的表达形式为包涵体及其极低的复性效率,给我们的工作带来极大困难.因此,我们采用新的表达载体构建了单链抗体的可溶性表达菌株pPL450-scFv和pRose-scFv,实现了单链抗体的大量制备,为后期的研究工作开辟了广阔的前景.我们经过一系列的分离纯化手段得到了纯度较高的单链抗体,硒化后引入催化基团获得了具有GPX活力的抗体酶.在此基础上我们又探讨了单链抗体酶的基本酶学性质及其对大鼠乳鼠表皮细胞抗紫外线辐射损伤的保护作用,进一步确认了具有GPX活性的单链抗体酶清除自由基的抗氧化生物学活性.
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