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大鼠束缚-浸水应激(restraint water-immersion stress,RWIS)模型近年来在研究应激性胃粘膜损伤的发生机制及其临床治疗药物的筛选等方面被广泛应用。本实验室近年来的研究结果显示,束缚-浸水应激(1h)条件下,调节胃肠运动的较高级中枢下丘脑室旁核(PVN)、视上核(SON)、延髓迷走复合体(DVC)等部位Fos蛋白表达明显增多,这表明上述结构参与了束缚-浸水应激反应。但作为较低级中枢的脊髓是否参与了束缚-浸水应激,未见有文献报道。CRH是一种重要的应激激素,参与多种应激反应,如固定应激、烫伤应激等。对于CRH在束缚-浸水应激中是否也发挥一定的作用,尚没有研究报道。本文利用免疫组化技术,以Fos蛋白、CRH为标记物,观察束缚-浸水应激刺激对下丘脑室旁核(PVN)、视上核(SON)、延髓迷走复合体(DVC)及骶髓中Fos蛋白、CRH表达量的变化,以揭示束缚-浸水应激对上述结构中CRH神经元活动的影响。 实验研究分为三部分: 第一部分,探索免疫组化显示中枢内CRH神经元的最好方法。通过对秋水仙素的不同注射方式(腹腔注射、侧脑室注射、空白对照)的比较,寻找显示中枢内CRH神经元最合理的方法。结果显示:腹腔注射组与侧脑室注射组相对于空白对照组CRH神经元形态更清晰。侧脑室注射对动物会产生病理性伤害,对实验结果影响较大。综合上述因素,认为腹腔注射秋水仙素预处理是显示中枢内CRH神经元的最理想方法。 第二部分,RWIS对大鼠骶部脊髓Fos蛋白表达的影响。结果表明:与对照组相比,骶髓后角、骶后联合核中Fos蛋白表达的平均累积光密度显著增加;骶髓前角、骶前外侧角Fos蛋白免疫阳性神经元的个数显著增加。结果提示:骶髓后角、骶后联合核、骶髓前角、骶前外侧角中参与束缚-浸水应激反应的神经元增多。 第三部分,RWIS对大鼠下丘脑、延髓、骶部脊髓中CRH及CRH+Fos表达的影响。结果表明:骶髓前角、后角、骶前外侧角,延髓迷走复合体,下丘脑室旁核中均有CRH免疫阳性神经元胞体及CRH神经纤维,而下丘脑视上核中只有CRH神经纤维,没有发现CRH神经元胞体。与对照组相比,应激组骶髓前角、后角、骶前外侧角,延髓迷走复合体,下丘脑室旁核CRH免疫阳性标记的平均累积光密度及CRH+Fos免疫阳性神经元数目占Fos免疫阳性神经元数目(兴奋细胞)的比例显著增加(P<0.05),提示上述结构存在CRH神经元,这些结构中参与束缚-浸水应激反应的CRH神经元数量增多。 上述结果表明,大鼠束缚-浸水应激可引起骶部脊髓前角、后角、骶前外侧角和骶后联合核中神经元内Fos表达增强,提示骶部脊髓的上述结构中有大量的神经元参与了束缚-浸水应激反应。被束缚-浸水应激刺激激活的延髓迷走复合体,下丘脑室旁核、骶髓前角、后角、骶前外侧角和骶后联合核的神经元中有CRH能神经元。束缚-浸水应激可以使更多的CRH神经元兴奋。CRH神经元参与束缚-浸水应激过程的作用机制还需要进一步研究。