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目的:1、分析肿瘤转移抑制基因TCF21与Kiss-1对结直肠癌临床病理特性的影响;探讨二者表达情况的相关性。2、分析siRNA沉默结直肠癌HT-29细胞株TCF21基因对Kiss-1基因表达水平的影响,并观察受抑制后细胞增殖、侵袭及迁移能力等生物学行为的变化。方法:1、采用免疫组织化学法检测71例结直肠癌原发病灶及其相应癌旁正常组织中TCF21与Kiss-1基因蛋白的表达情况。2、采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)法从结直肠癌细胞株Lovo,SW480,HT-29中筛选出TCF21与Kiss-1基因mRNA的表达水平均相对较高者,备用。3、设计3条siRNA-TCF21干扰分子片段,利用脂质体lipofectamineTM2000将siRNA转染人结直肠癌HT-29细胞株;采用qRT-PCR法检测48h后TCF21mRNA表达水平的变化情况,筛选出干扰抑制效率最高的分子片段;采用免疫印迹(Western-blot)法检测该片段转染72h后TCF21蛋白的表达水平,鉴定TCF21基因的沉默效果。4、TCF21基因成功沉默后,同时检测该组干扰48h及72h后Kiss-1基因mRNA与蛋白表达水平的变化情况。5、将该siRNA转染人结直肠癌HT-29细胞株,采用Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测转染前后细胞的增殖能力;Transwell小室法检测转染前后细胞侵袭及迁移能力的变化。结果:1、结直肠癌原发病灶中TCF21与Kiss-1基因的阳性表达率分别为66.20%与70.42%,均明显低于癌旁正常组织的91.55%与94.37%(P<0.001);且二者的表达水平均与患者的淋巴结转移、远处器官及临床TNM分期有关(P<0.05);但与患者的性别、年龄、分化程度、病理类型、侵润深度、脉管内癌栓、瘤体大小、坏死等无关(P>0.05);二者的表达存在着明显的正相关性(r=0.450,P<0.05)。2、结直肠癌细胞株HT-29中TCF21与Kiss-1基因mRNA的表达水平均相对高于SW480,Lovo细胞株。3、转染了siRNA的HT-29细胞3组,si1组中TCF21mRNA与蛋白的表达水平均明显降低,与对照组间差异有统计学意义(P<0.05),TCF21基因被成功沉默。4、si1组中Kiss-1mRNA和蛋白的表达水平亦明显降低,与对照组间差异具有统计学意义(P<0.05),Kiss-1基因的表达被下调。5、siRNA成功沉默HT-29细胞后,CCK-8法显示细胞增殖能力明显增强(P<0.01);Transwell小室实验显示,细胞侵袭及迁移能力亦明显增强(P<0.01)。结论:1、TCF21与Kiss-1基因的表达存在着明显的正相关性,二者的表达缺失与结直肠癌的进展过程密切相关,并可能是结直肠癌远处转移风险增高的促进因素。2、沉默结直肠癌HT-29细胞株TCF21基因的表达,可引起Kiss-1基因mRNA和蛋白表达水平的共同下降,并导致细胞增殖、侵袭及迁移能力的增强。3、结直肠癌病变进展过程中Kiss-1基因可能是作为下游功能基因,接受TCF21基因的转录调控而发挥其肿瘤转移抑制效应。