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背景和目的：近年来，乳腺癌发病率逐年升高。与其他乳腺癌亚型相比，三阴性乳腺癌(Triple negative breast cancer，TNBC)易转移，易复发，预后最差。此外，TNBC由于缺乏相应的治疗受体，对内分泌治疗和Her2靶向疗法不敏感，是所有乳腺癌中最难治的类型。因此，化疗仍是临床上晚期TNBC最常用的治疗方式。奥沙利铂（Oxaliplatin，Oxa）是第三代铂类抗癌药，被广泛用于包括TNBC在内的多种实体肿瘤的治疗，但是药物的副作用和耐药性导致晚期TNBC患者治疗效果欠佳。寻找能够改善TNBC化疗敏感性的治疗靶点，对于增强TNBC化疗敏感性和减轻化疗相关副反应具有重要临床意义。
辅助转录因子PC4（Positive Cofactor4，PC4）最初被确定为一种多功能辅助转录因子，能够通过与多种基因和组织特异性激活因子相互作用介导转录激活。PC4除了在转录中发挥作用外，PC4在体外和体内还具有多种细胞功能，包括DNA复制和修复、维持基因组稳定性和异染色质基因沉默等。此外，最近的研究发现PC4在不同类型的肿瘤中与肿瘤进展有相关性。PC4在多种肿瘤和肿瘤细胞系中表达水平上调，通过多种途径参与肿瘤的增殖、侵袭、转移以及放化疗敏感性。近年来，靶向PC4以改善肿瘤治疗效应的小分子抑制剂已显示出较好的临床应用前景，提示PC4可能是改善肿瘤治疗敏感性的潜在靶点。然而，TNBC是一种较为特殊恶性肿瘤，PC4是否可以作为改善TNBC化疗的潜在靶点仍有待进一步探索。本文旨在研究PC4在TNBC细胞中的表达特点及其在调节奥沙利铂化疗敏感性中的作用和初步机制，为改善TNBC患者化疗提供新的思路。
方法：1.PC4在TNBC细胞中的表达特点研究。选择常用的两种TNBC细胞（MDA-MB-231，MDA-MB-453）和两种非TNBC细胞(MDA-MB-361， SK-BR-3)作为研究对象,使用q-PCR检测PC4基因的mRNA表达水平，通过Western blot和免疫荧光染色检测PC4蛋白表达水平。2.下调PC4增强 TNBC细胞对 Oxa治疗敏感性的效应研究。通过慢病毒转染在MDA-MB-231和MDA-MB-453两种TNBC细胞中构建PC4稳定低表达的细胞株；用Oxa分别处理对照组（ Control组）和稳定敲低PC4组（shPC4-1组和shPC4-2组）。通过CCK-8实验、集落形成实验评估下调PC4是否增强Oxa对各组TNBC细胞的生长抑制作用；通过Hoechst免疫荧光染色、流式凋亡分析、TUNEL染色和Western blot评估下调PC4是否增强Oxa对各组TNBC细胞的凋亡诱导效应。最后，通过裸鼠荷瘤模型进一步评价下调PC4增强TNBC细胞对Oxa治疗敏感性的在体效应。3.下调PC4增强TNBC细胞对Oxa治疗敏感性的初步机制研究。首先，在下调PC4后，检测TNBC细胞和移植肿瘤中mTOR信号通路相关蛋白表达水平，以评价下调PC4是否抑制mTOR信号通路。为进一步探究mTOR是否是PC4增强TNBC对Oxa治疗敏感性的重要机制，将稳定敲低PC4的TNBC细胞用mTOR激动剂MHY1485进行处理，并比较mTOR通路激活后是否影响PC4增强TNBC细胞对Oxa治疗敏感性的效应。
结果：1.q-PCR、Western blot和免疫荧光染色结果显示，PC4在两种TNBC细胞中的转录水平和蛋白表达水平均高于另外两种非TNBC细胞。2.CCK-8实验和集落形成实验结果显示，敲低PC4进一步增强了Oxa对TNBC细胞的生长抑制作用；Western blot结果表明，Oxa处理后，敲低PC4的TNBC细胞凋亡相关蛋白水平明显高于PC4未敲低组。此外，流式细胞术、Hoechst染色结果也显示敲低PC4可增加奥沙利铂诱导TNBC细胞凋亡的效应。在体内实验中，无胸腺裸鼠荷瘤结果显示在Oxa治疗下敲低PC4组肿瘤生长更慢、体积更小、肿瘤湿重更轻。移植肿瘤病理组织切片的TUNEL染色和Cleaved caspase3免疫荧光染色结果也显示，敲低PC4组移植肿瘤在奥沙利铂治疗后凋亡细胞更多。3.在TNBC细胞中敲低PC4显著抑制了p-mTOR蛋白、p-4EBP1蛋白、p-S6RP蛋白的表达，表明敲低PC4抑制了mTOR信号通路的激活。而mTOR激动剂MHY1485可部分逆转敲低PC4增强TNBC对奥沙利铂治疗敏感性的效应，表明下调PC4增强TNBC对奥沙利铂治疗敏感性的机制可能与mTOR信号通路抑制有关。
结论：1.与非TNBC细胞比较，PC4在TNBC细胞中表达水平显著升高。2.在体内外实验中，下调PC4增强了TNBC细胞对奥沙利铂的化疗敏感性。3.下调PC4增强TNBC对奥沙利铂治疗敏感性的机制可能与mTOR信号通路抑制有关。综上所述，下调PC4可能是改善TNBC化疗敏感性的潜在治疗策略。
辅助转录因子PC4（Positive Cofactor4，PC4）最初被确定为一种多功能辅助转录因子，能够通过与多种基因和组织特异性激活因子相互作用介导转录激活。PC4除了在转录中发挥作用外，PC4在体外和体内还具有多种细胞功能，包括DNA复制和修复、维持基因组稳定性和异染色质基因沉默等。此外，最近的研究发现PC4在不同类型的肿瘤中与肿瘤进展有相关性。PC4在多种肿瘤和肿瘤细胞系中表达水平上调，通过多种途径参与肿瘤的增殖、侵袭、转移以及放化疗敏感性。近年来，靶向PC4以改善肿瘤治疗效应的小分子抑制剂已显示出较好的临床应用前景，提示PC4可能是改善肿瘤治疗敏感性的潜在靶点。然而，TNBC是一种较为特殊恶性肿瘤，PC4是否可以作为改善TNBC化疗的潜在靶点仍有待进一步探索。本文旨在研究PC4在TNBC细胞中的表达特点及其在调节奥沙利铂化疗敏感性中的作用和初步机制，为改善TNBC患者化疗提供新的思路。
方法：1.PC4在TNBC细胞中的表达特点研究。选择常用的两种TNBC细胞（MDA-MB-231，MDA-MB-453）和两种非TNBC细胞(MDA-MB-361， SK-BR-3)作为研究对象,使用q-PCR检测PC4基因的mRNA表达水平，通过Western blot和免疫荧光染色检测PC4蛋白表达水平。2.下调PC4增强 TNBC细胞对 Oxa治疗敏感性的效应研究。通过慢病毒转染在MDA-MB-231和MDA-MB-453两种TNBC细胞中构建PC4稳定低表达的细胞株；用Oxa分别处理对照组（ Control组）和稳定敲低PC4组（shPC4-1组和shPC4-2组）。通过CCK-8实验、集落形成实验评估下调PC4是否增强Oxa对各组TNBC细胞的生长抑制作用；通过Hoechst免疫荧光染色、流式凋亡分析、TUNEL染色和Western blot评估下调PC4是否增强Oxa对各组TNBC细胞的凋亡诱导效应。最后，通过裸鼠荷瘤模型进一步评价下调PC4增强TNBC细胞对Oxa治疗敏感性的在体效应。3.下调PC4增强TNBC细胞对Oxa治疗敏感性的初步机制研究。首先，在下调PC4后，检测TNBC细胞和移植肿瘤中mTOR信号通路相关蛋白表达水平，以评价下调PC4是否抑制mTOR信号通路。为进一步探究mTOR是否是PC4增强TNBC对Oxa治疗敏感性的重要机制，将稳定敲低PC4的TNBC细胞用mTOR激动剂MHY1485进行处理，并比较mTOR通路激活后是否影响PC4增强TNBC细胞对Oxa治疗敏感性的效应。
结果：1.q-PCR、Western blot和免疫荧光染色结果显示，PC4在两种TNBC细胞中的转录水平和蛋白表达水平均高于另外两种非TNBC细胞。2.CCK-8实验和集落形成实验结果显示，敲低PC4进一步增强了Oxa对TNBC细胞的生长抑制作用；Western blot结果表明，Oxa处理后，敲低PC4的TNBC细胞凋亡相关蛋白水平明显高于PC4未敲低组。此外，流式细胞术、Hoechst染色结果也显示敲低PC4可增加奥沙利铂诱导TNBC细胞凋亡的效应。在体内实验中，无胸腺裸鼠荷瘤结果显示在Oxa治疗下敲低PC4组肿瘤生长更慢、体积更小、肿瘤湿重更轻。移植肿瘤病理组织切片的TUNEL染色和Cleaved caspase3免疫荧光染色结果也显示，敲低PC4组移植肿瘤在奥沙利铂治疗后凋亡细胞更多。3.在TNBC细胞中敲低PC4显著抑制了p-mTOR蛋白、p-4EBP1蛋白、p-S6RP蛋白的表达，表明敲低PC4抑制了mTOR信号通路的激活。而mTOR激动剂MHY1485可部分逆转敲低PC4增强TNBC对奥沙利铂治疗敏感性的效应，表明下调PC4增强TNBC对奥沙利铂治疗敏感性的机制可能与mTOR信号通路抑制有关。
结论：1.与非TNBC细胞比较，PC4在TNBC细胞中表达水平显著升高。2.在体内外实验中，下调PC4增强了TNBC细胞对奥沙利铂的化疗敏感性。3.下调PC4增强TNBC对奥沙利铂治疗敏感性的机制可能与mTOR信号通路抑制有关。综上所述，下调PC4可能是改善TNBC化疗敏感性的潜在治疗策略。