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目的:肺癌是全球发病率最高的恶性肿瘤,过去单纯的放化疗治疗方案已不能更好地战胜肿瘤,近些年以表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)为代表的高效、低毒的分子靶向药物在临床治疗中得到比较满意的效果。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是一种具有酪氨酸激酶活性的糖蛋白受体,其高表达可以促进肿瘤的增殖、血管生成、侵袭转移等[1]。厄洛替尼是EGFR-TKIs的代表药物之一,通过阻断肿瘤细胞本身EGFR酪氨酸激酶磷酸化,抑制下游信号传导,诱导肿瘤细胞凋亡,进而使肿瘤生长受到抑制。临床发现EGFR-TKI也能抑制转移趋势。因此猜测其可能也在通过潜在的途径抑制着肿瘤的侵袭转移行为。整合素(Integrin)和CD44是肿瘤微环境中黏附分子家族的重要成员,介导细胞与细胞、基质间的黏附,其表达上调,黏附能力增强,促进肿瘤向远处转移。研究证实在胃癌、头颈部等肿瘤中,EGFR与Integrin和CD44存在着交叉关系,但在肺癌中是否也存在这种关系,以及EGFR-TKI是否通过这一途径抑制着肿瘤的侵袭和转移目前还尚不得知。本研究用体外培养的方法主要研究EGFR-TKIs与CD44、Integrinβ3之间的关系,进一步探讨EGFR-TKIs抑制肿瘤转移的机制。方法:1细胞培养用含10%胎牛血清的1640培养基常规传代培养HCC827细胞,置于含5%C02、95%、37℃湿度的恒温培养箱中培养。2 MTT法检测经HA、FN刺激后,不同浓度的厄洛替尼对取人非小细胞肺癌细胞HCC827的增殖抑制作用,并计算药物作用24h后细胞活性及半数抑制浓度(IC50),做出生长曲线折线图。3应用流式细胞术的方法检测HA、FN刺激前后及厄洛替尼作用于HA、FN刺激后的细胞,其CD44、Integrinβ3的表达情况。4应用Transwell实验技术检测HA、FN刺激前后及厄洛替尼作用于HA、FN刺激后的细胞,其转移能力的变化情况。5应用q RT-PCR技术检测HA、FN刺激前后及厄洛替尼作用于HA、FN刺激后的细胞,其EGFR、CD44、Integrinβ3、FAK基因的m RNA的表达情况。6应用Western-blot的方法检测HA、FN刺激前后及厄洛替尼作用于HA、FN刺激后的细胞,其p FAK、FAK、p EGFR、EGFR蛋白的表达水平7统计学方法:应用SPSS 21.0进行数据处理,计量资料采用x±s或M±QR表示,多组比较以单因素方差分析及K-W H秩和检验进行统计分析,采用LSD法进行各组间两两比较,以P<0.05为有统计学意义。结果:1 MTT法检测厄洛替尼对肿瘤细胞增殖的抑制作用HCC827HCC827细胞用HA、FN刺激后,经不同浓度的厄洛替尼处理24h后,IC50为0.127u M;厄洛替尼0.001u M组、0.01u M组、0.1u M组、1u M组、10u M组分别作用于细胞24h后的细胞活性为:82.36±6.53%、68.06±3.76%、42.30±3.33%、34.28±4.91%、29.32±4.64%,随着浓度增加,细胞活性逐渐降低,呈剂量依赖型(P<0.05)。2通过流式细胞术方法检测细胞膜表面分子CD44+、Integrinβ3+表达A组(空白对照)、B组(HA、FN刺激)、C组(HA、FN刺激后加药)其CD44的表达量分别为24.48±2.35%、40.77±3.66%、20.01±1.43%;Integrinβ3+的表达量分别为0.44±0.25%、0.42±0.17%、0.26±0.07%;CD44 B组与A组、C组与B组均有统计学差异(P<0.05)、Integrinβ3+各组间尚不能认为有差异(P>0.05)。3 Transwell小室侵袭实验检测厄洛替尼对肿瘤细胞转移的影响A组(空白对照)、B组(HA、FN刺激)、C组(HA、FN刺激后加药)其转移的细胞数为7.40±1.50、18.27±1.87、1.87±1.19;B组与A组、C组与B组比较均有显著性差异(P<0.05)。4应用q RT-PCR法检测厄洛替尼对肿瘤细胞的EGFR、CD44、Integrinβ3、FAK基因表达的影响A组(空白对照)、B组(HA、FN刺激)、C组(HA、FN刺激后加药)其EGFR的表达量分别为:1.24±2.2、78.74±496.06、0.64±2.4;其CD44的表达量分别为:176.71±192.59、18079.52±12618.91、312.09±478.78;其Integrinβ3的表达量分别为:0.11±8.15、80.24±336.14、0.01±0.03;其FAK的表达量分别为:17.40±55.40、1094.06±1035.37、12.67±146.22。B组与A组、C组与B组比较均有显著性差异(P<0.05)。5应用Western-blot的方法检测厄洛替尼对EGFR、CD44与Integrinβ3共同信号通路中关键因子p FAK、FAK及p EGFR、EGFR蛋白表达的影响A组(空白对照)、B组(HA、FN刺激)、C组(HA、FN刺激后加药)其p FAK的表达量分别为:1.08±0.26、1.22±0.13、1.05±0.11;B组与A组、C组与B组比较均有显著性差异(P<0.05)。其FAK的表达量分别为:0.99±0.11、0.95±0.42、0.92±0.07;B组与A组、C组与B组比较无显著性差异(P>0.05)。其p EGFR的表达量为:0.96±0.08、1.36±0.11、0.37±0.05;B组与A组、C组与B组比较均有显著性差异(P<0.05)。其EGFR的表达量分别为:0.93±0.06、0.98±0.05、0.94±0.07;B组与A组、C组与B组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:1厄洛替尼可抑制HCC827的细胞活性和增殖能力,浓度越高细胞活性和体外增殖能力越低。2厄洛替尼能从细胞水平上抑制CD44+、Integrinβ3+的表达,使细胞转移能力下降。3厄洛替尼能从蛋白水平上显著降低EGFR、CD44、Integrinβ3信号通路中的关键分子FAK的表达。4厄洛替尼能从m RNA水平上降低EGFR、CD44、Integrinβ3的表达。