【摘 要】
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目的:明确微小RNA-27b(miR-27b)水平对人胰腺癌细胞BXPC-3增殖、迁移和侵袭生物学行为的影响,及其对血管内皮生长因子C(VEGFC)的靶向调控作用。方法:1.采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测人胰腺癌细胞BXPC-3及正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7中miR-27b的表达水平。2.探究miR-27b对人胰腺癌BXPC-3细胞生物学行为的影响。采用非脂质体转染法向BX
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目的:明确微小RNA-27b（miR-27b）水平对人胰腺癌细胞BXPC-3增殖、迁移和侵袭生物学行为的影响,及其对血管内皮生长因子C（VEGFC）的靶向调控作用。方法:1.采用实时荧光定量PCR（RT-q PCR）检测人胰腺癌细胞BXPC-3及正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7中miR-27b的表达水平。2.探究miR-27b对人胰腺癌BXPC-3细胞生物学行为的影响。采用非脂质体转染法向BXPC-3细胞转染miR-27b mimic/inhibitor及miR-27b mimic NC/inhibitor NC,RT-q PCR检测48h转染效率;通过过表达或抑制miR-27b的表达,采用CCK8（Cell Counting Kit-8）法检测不同转染时间（0h、24h、48h、72h）细胞增殖情况;采用细胞划痕实验检测细胞迁移情况;采用Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭能力。3.为进一步探索miR-27b与VEGFC的靶向关系,采用生物信息学方法预测miR-27b靶基因VEGFC,双荧光素酶报告基因实验验证miR-27b与VEGFC的靶向关系,免疫印迹法检测VEGFC的表达。4.采用相关系数r分析miR-27b mimic/inhibitor水平下,BXPC-3细胞增殖与迁移、侵袭能力及VEGFC之间的相关性。结果:1.与人正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7相比,miR-27b在人胰腺癌细胞BXPC-3中呈高表达水平,差异具有统计学意义（p<0.05）。转染miR-27b mimic48h后,BXPC-3细胞中miR-27b的表达明显上调,差异具有统计学意义（p<0.05）。转染miR-27b inhibitor后,BXPC-3细胞中miR-27b的表达明显下调,差异具有统计学意义（p<0.01）。2.miR-27b mimic组细胞增殖能力在各检测时间点均强于miR-27b mimic NC组（p<0.05）,miR-27b inhibitor组细胞增殖能力在各检测时间点均弱于miR-27b inhibitor NC组（p<0.05）。细胞划痕实验和Transwell小室实验均证实,miR-27b mimic组细胞迁移能力强于miR-27b mimic NC组（p<0.05）,miR-27b inhibitor组细胞迁移能力弱于miR-27b inhibitor NC组（p<0.05）。Transwell小室实验证实,miR-27b mimic组细胞侵袭能力强于miR-27b mimic NC（p<0.05）,而miR-27b inhibitor组细胞侵袭能力弱于miR-27b inhibitor NC组（p<0.05）。3.VEGFC 3’UTR（WT）和miR-27b-3p mimic共转染后,荧光素酶的活性明显下降,差异具有统计学意义（p<0.01）,说明miR-27b-3p可以直接靶向结合VEGFC 3’UTR。4.Western blot实验显示,相比未干预组BXPC-3细胞,miR-27b inhibitor组VEGFC蛋白表达增加,差异具有统计学意义（p<0.01）。5.miR-27b mimic转染条件下,BXPC-3细胞增殖能力与Transwell迁移能力、划痕迁移能力和Transwell侵袭能力均为正相关性,相关系数|r|分别为0.92、0.35、0.58。miR-27b inhibitor转染条件下,细胞增殖能力与Transwell迁移能力、划痕迁移能力和Transwell侵袭能力均具有正相关性,相关系数|r|分别为1、0.82、0.26。VEGFC的表达水平与细胞增殖能力、Transwell迁移能力均具有正相关性,相关系数|r|分别为0.5、0.45;而与Transwell侵袭能力、划痕迁移能力具有负相关性,相关系数|r|分别为0.23、0.08。结论:1.miR-27b在人胰腺癌细胞BXPC-3中表达异常上调;2.miR-27b具有促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的生物学功能,发挥促癌因子的作用;3.miR-27b直接靶向VEGFC,下调VEGFC在胰腺癌中的表达。4.miR-27b mimic/inhibitor转染条件下,BXPC-3细胞增殖与迁移、侵袭及VEGFC水平之间具有相关性。
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