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目的1探讨缺血后处理对全脑缺血大鼠海马区细胞周期的影响;2探讨缺血后处理对全脑缺血大鼠海马区Notch1活性的影响。方法128只康健的雄性SD大鼠随机分为:假手术组(n=32)、全脑缺血组(n=32)、缺血后处理组(n=32)、抑制剂组(n=32)。全脑缺血模型利用改良的Pulsinelli四血管阻断法制作;缺血后处理是在彻底再灌注之前进行反复3次的再通/阻断血管的方式;抑制剂组是在实施缺血后处理之前3 h按10mg/(kg·d)腹腔注射DAPT(Notch1抑制剂)。分别在大鼠模型制作成功后48 h和72 h通过水迷宫检测学习记忆能力;在6h、24h、48h、72h时间点运用HE染色观察脑组织细胞形态变化;运用免疫组化和Western blotting法观察各时间点Cyclin D1、CDK4、Notch1在海马区的表达情况。结果1水迷宫检测结果:与假手术组比较,全脑缺血组大鼠在(48h、72h)时间点的逃避潜伏期明显延伸、穿台次数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);与全脑缺血组比较,缺血后处理组大鼠在相应时间点的潜伏期明显缩短、穿台次数明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组大鼠在相应时间点的潜伏期明显延长、穿台次数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。2细胞形态学结果(HE染色):与假手术组比较,全脑缺血组各时间点(6h、24h、48h、72h)海马区存活细胞率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与全脑缺血组比较,缺血后处理组在相应时间点海马区存活细胞率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组相应时间点海马区存活细胞率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。3 Cyclin D1、CDK4免疫组化与Western blotting分析结果:免疫组化结果:Cyclin D1、CDK4免疫组化染色呈棕黄色,主要在海马区神经元细胞核中表达,随时间延长逐渐升高,且都在72h达高峰。与假手术组比较,全脑缺血组大鼠在各时间点(6h、24h、48h、72h)Cyclin D1、CDK4阳性细胞数增加,差异有统计学意义(P<0.05);与全脑缺血组比较,缺血后处理组大鼠在相应时间点Cyclin D1、CDK4阳性细胞数明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组大鼠在相应时间点Cyclin D1、CDK4阳性细胞数升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting分析结果:Cyclin D1、CDK4蛋白表达随时间延长逐渐升高,且均在72h达高峰。与假手术组比较,全脑缺血组大鼠在各时间点(6h、24h、48h、72h)Cyclin D1、CDK4蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);与全脑缺血组比较,缺血后处理组大鼠在相应时间点Cyclin D1、CDK4蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组大鼠在相应时间点Cyclin D1、CDK4蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。4 Notch1免疫组化与Western blotting分析结果:免疫组化结果:Notch1阳性细胞在假手术组胞浆弱表达,其他组在细胞核中表达,染色呈棕黄色。与假手术组比较,全脑缺血组大鼠在各时间点(6h、24h、48h、72h)Notch1阳性细胞数明显升高,且48h达高峰,差异有统计学意义(P<0.05);与全脑缺血组比较,缺血后处理组大鼠在相应时间点Notch1阳性细胞数明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组大鼠在相应时间点Notch1阳性细胞数明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting分析结果:与假手术组比较,全脑缺血组大鼠在各时间点(6h、24h、48h、72h)Notch1蛋白的表达水平明显增加,且48h达高峰,差异有统计学意义(P<0.05);与全脑缺血组比较,缺血后处理组大鼠在相应时间点Notch1蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与缺血后处理组比较,抑制剂组大鼠在相应时间点Notch1蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1缺血后处理通过降低全脑缺血大鼠海马区CyclinD1、CDK4的表达从而起到调控细胞周期而保护神经元的作用;2缺血后处理通过提高Notch1活性从而抑制Cyclin D1、CDK4的表达而调控细胞周期。