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胆管癌（cholangiocarcinoma,CCA）是起源于肝内或肝外胆管黏膜上皮细胞的恶性肿瘤,临床上以肝外胆管癌较多见。据全球范围的流行病学调查显示,肝外胆管癌患者最近20年的发病率、死亡率呈增加趋势,但目前世界上并没有相关的病因学解释。肿瘤在发生发展过程中存在多因素、多阶段、多步骤和多基因的参与过程,而有丝分裂调控异常,细胞增殖失调是肿瘤发生的重要机制。polo样激酶1（polo-like kinase 1,PLK1）、Aurora A是参与细胞有丝分裂启动与维持的重要调控酶,而且研究发现PLK1、Aurora A可能通过Aurora A-Bora-PLK1控制有丝分裂的启动。目前已有PLK1、Aurora A分别在许多消化系统肿瘤中研究的报道,如食管癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、胰腺癌等,然而尚未见在肝外胆管癌中的相关报道,而且目前较少将组织和血清相结合研究PLK1、Aurora A在肝外胆管癌中的表达与肿瘤发展的关系。目的:在本课题中,我们通过Eli VisionTMPlus免疫组织化学技术（immunohistochemistry,IHC）及ELISA法（双抗体夹心法）研究PLK1、Aurora A在肝外胆管癌患者癌组织和血清中的表达水平,探讨以下几个问题:1、探讨PLK1、Aurora A在肝外胆管癌组织、癌旁正常组织中的表达及与临床病理特征（临床分期、分化程度、肿瘤部位、神经浸润及淋巴结转移）的关系;2、探讨PLK1、Aurora A在肝外胆管癌组织表达的相互关系;3、探讨PLK1、Aurora A在肝外胆管癌患者术前、术后和健康人血清中的表达;4、探讨免疫组织化学技术和ELISA两种方法检测肝外胆管癌患者组织和血清中表达的一致性。方法:组织标本来自2009年2月至2015年9月在中国人民解放军第二五一医院普外科就诊的肝外胆管癌患者手术后标本54例,癌旁正常组织20例,血清标本来自2013年1月至2015年12月在中国人民解放军第二五一医院普外科行手术治疗的25例肝外胆管癌患者（与上述肝外胆管癌组织标本来源相同）术前1天及术后15天血清,健康人自愿者15例。分别检测PLK1、Aurora A在肝外胆管癌组织和血清中的表达情况;分析其与患者的性别、年龄、肿瘤的分化程度、神经侵犯、TNM分期、所在部位以及淋巴结转移的关系以及两者之间表达的关系;分析两种方法检测PLK1、Aurora A表达的一致性。数据采用SPSS 19.0统计软件进行分析。结果:1.PLK1和Aurora A的阳性表达以细胞核为主,细胞质也有表达。肝外胆管癌患者中,癌组织中PLK1和Aurora A的阳性表达率均明显高于癌旁胆管组织（66.7%vs.25.0%;63.0%vs.15.0%,均P<0.05）。2.肝外胆管癌组织中PLK1和Aurora A的表达与患者性别、年龄、肿瘤的神经侵犯及部位无关（均P>0.05）,而与肿瘤的分化程度、TNM分期和淋巴结转移密切有关（均P<0.05）,PLK1和Aurora A在低分化、有淋巴结转移及TNM III/IV期的肝外胆管癌组织中的表达明显高于高中分化、无淋巴转移及TNM I/II期的肝外胆管癌组织。3.肝外胆管癌患者术前血清中PLK1和Aurora A的浓度均明显高于健康人群（434.85 pg/m L vs.256.00 pg/m L;644.64 pg/m L vs.375.73 pg/m L,均P<0.05）;肝外胆管癌患者术后血清PLK1与Aurora A的平均浓度与术前比较均明显降低（P<0.05）。4.用免疫组织化学法检测PLK1在25例肝外胆管癌组织中17例呈阳性表达,8例呈阴性表达;Aurora A在25例肝外胆管癌组织中16例呈阳性表达,9例呈阴性表达;再结合ELISA试验结果,经Kendall检验分析,PLK1在癌组织中的表达水平与患者血清中的浓度具有一致性（r=0.55,P=0.01）,Aurora A在癌组织中的表达水平与患者血清中的浓度也具有一致性（r=0.64,P<0.01）。5.比较54例肝外胆管癌组织中PLK1与Aurora A的表达情况,经Spearman等级相关分析,肝外胆管癌组织中PLK1与Aurora A的表达呈正相关（r=0.47,P<0.01）;比较25例肝外胆管癌患者术前血清中PLK1与Aurora A水平,经Spearman等级相关分析,患者血清中PLK1与Aurora A的表达呈正相关（r=0.71,P<0.01）。结论:1.PLK1与Aurora A在肝外胆管癌患者组织和血清中高表达,在癌旁正常组织及健康人血清中低表达,这可能是肝外胆管癌重要的生物学特征;2.PLK1和Aurora A与肝外胆管癌的分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关,表明其可能参与了肝外胆管癌的浸润与转移,可为临床中肝外胆管癌的病情判断及治疗提供依据;3.PLK1和Aurora A在免疫组化和ELISA两种方法检测中具有一致性,而ELISA在临床中更易推广,可以为肝外胆管癌的诊断和病情监测提供更准确的依据;4.PLK1和Aurora A在肝外胆管癌组织和血清中的表达存在正相关,两者联合检测可以兼顾基因检测的敏感性和特异性,进而为肝外胆管癌的临床筛查、抗癌药物研发及预后监测提供理论依据。