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目的:套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)是一种难治的B细胞非霍奇金淋巴瘤,大多数患者临床侵袭性强,预后差,当前尚缺乏有效的治疗方案。地西他滨(Decitabine,DAC)是临床上最常用的一种去甲基化药物,具有明确的抗肿瘤活性,目前地西他滨对中、高危骨髓增生异常综合征(MDS)及难治性或复发性急性髓系白血病的治疗临床已达成共识,取得较好疗效,但其对MCL的治疗是否有效目前国内外鲜有报道。而硼替佐米(brotezomib,BTZ)是一种蛋白酶体抑制剂,其最主要用于多发性骨髓瘤的一线治疗,近年来研究报道,硼替佐米对复发或难治性MCL和弥漫大B细胞淋巴瘤患者亦发挥明确的抗肿瘤效应,已被NCCN推荐用于复发或难治性MCL和弥漫大B细胞淋巴瘤患者的治疗,但也仅仅用于二线治疗,仍有一部分患者对其单药治疗疗效不佳。因此,在世界范围内,寻找MCL有效的治疗方法和手段成为当前的研究热点。本研究拟采用体外细胞培养的方法,观察DAC、BTZ以及两种联合应用对人MCL细胞株增殖和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制,为MCL患者特别是复发难治MCL患者的联合用药治疗提供实验依据。方法:1用不同浓度的DAC、BTZ在体外对人MCL细胞株Jeko-1、Grante519细胞进行处理,采用CCK8法检测不同处理因素对细胞的增殖抑制作用。2采用流式细胞术(Flow cyometry,FCM)检测上述药物处理后对各组细胞凋亡的影响。3采用RT-PCR法检测上述药物对MCL细胞凋亡和信号传导相关基因PCDH8、NF-Kb、Caspas3、Bcl-2、CCND1、Bax m RNA表达水平的影响。4采用Western Blot方法检测不同处理因素对MCL细胞中PCDH8、NF-Kb、Caspas3、Bcl-2、CCND1、Bax蛋白表达水平的影响。结果:1.低浓度的DAC(0.1、1、10μmol/L)能明显抑制Jeko-1、Grante519细胞增殖并诱导其凋亡,其抑制效应呈剂量依赖和时间依赖性;经单药DAC处理后,在Jeko-1、Grante519细胞中均可观察到Caspase3、Bax表达水平的升高,Bcl-2、CCND1表达水平的降低,但NF-KB(P65)表达水平在各组之间则无明显差异;因PCDH8启动子区域过甲基化导致其表达水平减低的Jeko-1细胞,经DAC处理后,Jeko-1细胞中PCDH8表达水平明显升高,证实去甲基化治疗有效;2.高浓度的BTZ(0.2、0.4μmol/L)能明显抑制Jeko-1、Grante519细胞增殖并诱导其凋亡,其抑制效应呈剂量依赖和时间依赖性;单药BTZ均能引起Jeko-1、Grante519细胞中Caspase3、Bax表达水平的升高,NF-KB(P65)、Bcl-2、CCDN1表达水平降低,但对PCDH8表达水平无明显影响;3.DAC联合BTZ使Jeko-1、Grante519细胞的抑制率、凋亡率明显增加;且DAC对Jeko-1、Grante519细胞的增殖抑制及促凋亡作用大于BTZ;与对照组及单药处理组相比,DAC联合BTZ作用后能显著提高Jeko-1、Grante519细胞PCDH8、Caspase3、Bax表达水平,相反显著降低NF-KB(P65)、Bcl-2、CCND1表达水平。结论:1 DAC在一定浓度范围内对Jeko-1、Grante519细胞具有增殖抑制及促凋亡作用,其作用呈时间和剂量依赖性;其作用机制可能与DAC的去甲基化作用和细胞毒作用有关;并且DAC能够通过上调Caspase3、Bax表达水平,以及降低Bcl-2、CCND1的表达水平,以进一步调控细胞增殖及凋亡过程,从而发挥明显的抗肿瘤活性。2在一定浓度范围内BTZ可以增强Jeko-1、Grante519细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用;其作用机制可能与BTZ能够降低NF-KB信号通路活性,上调Caspase3、Bax表达水平,减低Bcl-2、CCND1表达水平,从而达到促进细胞凋亡,抑制细胞增殖的作用。3低浓度DAC具有去甲基化作用,高浓度DAC具有细胞毒性作用。4 DAC与BTZ具有正协同作用,其对MCL细胞的增殖抑制作用可能是两药联合后加强了对NF-KB信号通路的抑制作用,并且下调Bcl-2水平,上调Bax水平,从而引起下游的Caspase3蛋白表达水平进一步升高,以达到更高的抗肿瘤作用。这一实验结果可能为今后临床应用DAC联合BTZ治疗MCL提高新的理论依据。