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研究背景内皮祖细胞是一类能增殖并分化为血管内皮的前体细胞,内皮祖细胞在维持血管内皮的功能及血管新生中起重要作用。益气活血中药通冠胶囊对血管内皮细胞具有保护作用,能促进冠心病患者介入术后心功能的恢复,抑制介入术后再狭窄的发生。通冠胶囊的生物学作用与内皮祖细胞介导的再内皮化和改善缺血组织血供的生物学功能相似。同时,在通冠胶囊组方中,部分药物具有显著改善内皮祖细胞的增殖、粘附、迁移等生物学功能。研究目的探讨益气活血中药通冠胶囊对内皮祖细胞的生物学功能的作用及其机制。研究方法1临床资料回顾分析,选择符合入选条件的60例冠心病患者,其中冠心病基础用药30例和治疗组(冠心病基础用药+通冠胶囊)30例,回顾分析两组患者一般情况、冠脉造影和手术方式；对比分析术前、术后1月左室射血分数、室壁运动指数和心功能分级；术后1月,观察两组患者主要心血管事件发生率；对比分析术前和术后1月两组患者血清VEGF水平。2实验部分,给予SD大鼠通冠胶囊水煎剂灌胃,生理盐水灌胃做对照组,9天后提取大鼠外周血单个核细胞,用EGM-2完全培养基诱导其分化,通过观察细胞生长的形态学特征和激光共聚焦显微镜观察其具有内吞acLDL和结合UEA-1的内皮能力,鉴定为内皮祖细胞。对比两组的集落数量、迁移能力、粘附能力和血清VEGF水平。分离并培养健康志愿者循环内皮祖细胞,使用激光共聚焦显微镜鉴定其具有内皮功能,流式细胞仪检测其细胞表面抗原CD34+与VEGFR+2+表达。通过血清药理学研究方法,制备通冠胶囊含药血清,同时给予大鼠生理盐水灌胃,作为空白对照组。细胞经同步化后,随机分为四组：生理盐水组、通冠胶囊含药血清组、辛伐他汀组和通冠胶囊含药血清与PI3K/Akt抑制剂(Wortmannin+LY294002)组,干预24小时后,检测细胞迁移能力、粘附能力、增殖能力和细胞增殖周期比例。研究结果1临床资料回顾分析,两组患者术前基本资料、手术方式、左室射血分数以及室壁运动指数、心功能分级和血清VEGF水平无明显差异。术后1月,两组左室射血分数、室壁运动积分均较术前改善(均P＜0.05),治疗组较对照组可进一步改善左室射血分数及室壁运动积分(P＜0.05)。对照组有1例因重症左心功能不全,于术后4周死亡；两组患者在观察时间内均无靶血管血运重建。对照组新发的心功能衰竭发生率明显高于治疗组(P=0.045)；两组主要心血管事件发生率比较,治疗组为6.7%,对照组为33.3%,治疗组明显低于对照组(P=0.024)。组术前比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。两组术后30天较术前血清VEGF水平均减低,差异有显著性意义(P均＜0.05)。但是术后30天治疗组血清VEGF水平均明显高于安慰剂对照组,差异有显著性意义(P均＜0.01)。2大鼠内皮祖细胞的生长及形态学观察和鉴定：接种第5天,贴壁的梭状细胞开始从集落的边缘长出,形成典型的集落现象。第7天后形成了长梭状细胞。通过激光共聚焦显微镜观察,鉴定其为内皮祖细胞。3大鼠内皮祖细胞集落计数、迁移、粘附能力及血清VEGF水平结果：通冠胶囊组与生理盐水组相比,细胞集落数量和迁移能力明显增强,具有显著性差异(均P＜0.01),两组的粘附能力和血清VEGF水平无明显差异(均P＞0.05)。4人内皮祖细胞的鉴定结果：培养第5天,贴壁的梭状细胞开始从集落的边缘长出,形成典型的集落现象。第7天后形成了长梭状细胞。通过激光共聚焦显微镜观察,鉴定其为内皮祖细胞。经流式细胞仪检测,贴壁细胞同时表达CD34+和VEGFR-2+的为15.4±1.8%。5各分组人内皮祖细胞的迁移、粘附、增殖能力和增殖周期比例结果：1umol／L辛伐他汀细胞的增殖能力和增殖周期比例,与其它辛伐他汀浓度组比具有显著差异(P＜0.01)。各组与生理盐水组相比,细胞的迁移、粘附、增殖能力和细胞增殖周期期比例均显著显著增高(P＜0.01)。通冠胶囊组与辛伐他汀组相比,粘附能力、迁移和增殖周期比例明显降低(P＜0.01),但增殖能力明显提高(P＜0.05)。通冠胶囊与PI3K通道蛋白阻滞剂组相比,细胞迁移、粘附、增殖、细胞增殖周期比例均显著增高(P＜0.01)。结论1.通冠胶囊能够明显改善冠心病PCI术后患者左室射血分数、室壁运动积分和心功能分级,并上调PCI术后患者血清VEGF的水平。2.通冠胶囊能够显著动员大鼠骨髓内皮祖细胞至外周血循环,并增加其迁移能力。通冠胶囊含药血清能显著提高体外培养人内皮祖细胞的迁移、粘附能力、增殖能力和增殖周期比例,但作用效果不及辛伐他汀。PI3K/AKT通道蛋白阻滞剂明显减弱通冠胶囊的生物学功能。生理条件下,通冠胶囊改善内皮祖细胞的生物学功能机制可能其机制与PI3K/AKT通道的活化相关,但不完全依赖PI3K通道,同时通冠胶囊动员内皮祖细胞的机制可能不依赖于提高血清VEGF水平。