层状材料固定化青霉素酰化酶的研究

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本文以α—磷酸锆(α—ZrP)为主要载体,采取用赖氨酸、己二胺插层的方法固定化青霉素酰化酶,并对其性质进行了研究。另外,还用水滑石为载体直接固定化青霉素酰化酶。 首先用α—ZrP作载体,用吸附法、交联法结合使用固定化青霉素酰化酶,并对固定化条件进行优化。探索出一条适合此载体的固定化方法。步骤是:赖氨酸或己二胺插层,戊二醛活化,酶的固定化。固定化条件优化包括:载酶量的确定,插层客体量的确定,固定化温度、时间和pH值的确定,戊二醛使用浓度的确定等。 其次,对此固定化酶的催化条件进行了研究,包括固定化酶的温度效应、pH值效应和使用的重复性及稳定性。另外,还对此固定化酶进行了XRD分析。 在适宜条件下制得了较高活性的固定化酶。其中赖氨酸插层的固定化酶酶活达521 u/g,回收率达37.4%;己二胺插层固定化酶酶活达360.8u/g,回收率达36.7%。连续水解10批青霉素G钾盐溶液其活力未见有明显下降。 另外还测定了固定化酰化酶和游离酶的米氏常数,其值分别为3.109mmol/l(游离酶),3.916mmol/l(赖氨酸插层),11.24mmol/l(己二胺插层)。 最后,采用直接固定化,后戊二醛交联的方法对水滑石固定化青霉素酰化酶进行了研究。
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