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共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是一种不饱和脂肪酸,具有抗癌,抗氧化、抗动脉粥样硬化、增强免疫力、提高骨骼密度、防治糖尿病、降低胆固醇、促进生长发育等生理功能。CLA主要来源于反刍动物食品,但牛乳中的CLA水平相当低。添加化学合成的CLA可以提高乳中CLA含量,但是副产物难以处理,甚至有些化学原料会有一定的毒性。自然界许多微生物能够利用自身的酶将亚油酸(linoleic acid,LA)转化成 CLA。目前,人们将获得 CLA的注意力更多地转向了可食用的微生物,植物乳杆菌就是其中的一种。 本研究从实验室保藏的植物乳杆菌P8出发,利用N+离子束诱变技术对其进行诱变处理,筛选出CLA产量下降的负突变菌株,进行50代的稳定遗传。克隆野生型菌株亚油酸异构酶基因,构建质粒标准品,用实时荧光定量PCR检测负突变菌株和野生型菌株LAI基因mRNA表达的差异性。为探索产生CLA的分子基础提供理论依据,也为大力开发我区乳酸菌资源生产富含CLA保健乳提供技术支撑。 研究结果表明: (1)在真空度为10-3Pa,能量为15-20keV,束流为15mA,采用脉冲方式,离子束注入剂量为30~190×2.6×1013N+/cm29个梯度分别处理样品,得到“马鞍型”存活曲线。 (2)诱变处理后每个处理随机挑取30个菌,得到正突变菌株共36株,负突变菌株共66株,其中最高产 CLA正突变菌株和最低产 CLA负突变株产 CLA浓度分别为0.2751mg/mL和0.0330mg/mL,转化率为27.51%和3.30%。 (3)负突变菌株进行50次的传代后,有5株负突变菌株遗传稳定性良好。 (4)稳定遗传的5株负突变菌株与野生型菌株之间的起始拷贝数差异显著,(p<0.05),其中9-6,9-7,9-25,9-26,4株负突变菌株的起始拷贝数显著低于野生型菌株(p<0.05),9-8的起始拷贝数显著高于野生型菌株(p<0.05)。5株负突变菌株的起始拷贝数之间差异也显著,初步表明mRNA表达水平对CLA的产量有影响。