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动脉粥样硬化(AS)是危害人类健康的主要疾病。近年来本病的发生率在我国有明显增加的趋势。而经皮冠状动脉腔内成形术(percutaneous coronary transluminal angioplasty PTCA)术后再狭窄(RS)一直是其存在的棘手问题。两者均伴有血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)的增殖。细胞周期是细胞增殖的最后通道。许多研究表明,细胞凋亡在血管重塑、AS和RS中扮演了越来越重要的角色。VSMCs的过度增殖和凋亡不足既是AS斑块形成的主要病理基础,也是PTCA术后再狭窄形成的重要因素。因此,调节VSMCs凋亡可能成为抗AS、预防PTCA术后再狭窄的一种途径。多沙唑嗪( racemic-doxazosin ,(±)Doxazosin)是一种高选择性的α1受体阻断剂,已有试验表明,多沙唑嗪可能有防止RS形成的作用。但其心血管意外事件发生率较高,目前利用HPLC技术对(±)doxazosin进行手性拆分,可制备其单一光学异构体(?)doxazosin和(+)doxazosin。我们前期的研究表明,(±)doxazosin及其光学异构体对大鼠主动脉VSMCs具有抗增殖作用,且该抑制作用具有化学结构的立体选择性;其机制与阻断α1受体无关。在本研究中,我们应用Giemsa染色法及流式细胞仪(FCM)技术,探讨(±)doxazosin及其光学异构体抑制大鼠主动脉VSMCs增殖的机制。目的:体外培养大鼠主动脉VSMCs,观察(?)doxazosin、(+)doxazosin和(±)doxazosin对VSMCs细胞周期与凋亡的影响,探讨(±)doxazosin及其光学异构体抗VSMCs增殖的机制。方法:体外培养Sprague-Dawley(S-D)大鼠主动脉VSMCs,经传代及同步化后,分别给予浓度为30μmol·L-1和25μmol·L-1 (?)doxazosin、(+)doxazosin和(±)doxazosin,在无菌培养瓶中培养96 h和72 h,应用Giemsa染色法观察细胞凋亡的形态学变化;应用流式细胞仪(FCM)检测细胞增殖周期、凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白。结果1 (±)Doxazosin及其光学异构体对VSMCs细胞增殖周期的影响VSMCs细胞经(-)doxazosin、(+)doxazosin和(±)doxazosin处理72 h后,增殖周期时相分布和增殖指数发生了改变。与溶媒组比较,(-)doxazosin和(±)doxazosin组G0/G1期细胞均显著增多(P<0.01),S期细胞、G2/M期细胞和增殖指数均显著减少或降低(P<0.01),而(+)doxazosin组仅S期细胞显著减少(P<0.01)。与(-)doxazosin组比较,(+)doxazosin组G0/G1期细胞显著降低(P<0.01),S期细胞、G2/M期细胞和增殖指数均显著增多或增高(P<0.05～0.01)。而(±)doxazosin处理组各期细胞均无显著性差异。2 (±)Doxazosin及其光学异构体对大鼠主动脉VSMCs凋亡率的影响(-)Doxazosin、(+)doxazosin和(±)doxazosin作用于大鼠主动脉VSMCs 96 h,细胞形态学观察三种药物均对VSMCs表现出细胞凋亡的特征,且(?)doxazosin强于(+)doxazosin,与(±)doxazosin变化不大。利用FCM上机测得(?)doxazosin、(+)doxazosin和(±)doxazosin作用于VSMCs 72 h的凋亡率分别为6.06±0.31%、1.36±0.30%和3.63±0.99%。与溶媒组相比较,(?)doxazosin和(±)doxazosin均可诱导VSMCs凋亡(P<0.01),而(+)doxazosin不具有促进VSMCs凋亡的作用。(?)doxazosin的作用明显高于(+)doxazosin和(±)doxazosin(P<0.01)。3 (±)Doxazosin及其光学异构体对大鼠主动脉VSMCs凋亡蛋白Bcl-2、Bax的影响(?)Doxazosin、(+)doxazosin和(±)doxazosin作用于大鼠VSMCs 72 h,利用FCM上机测得(?)doxazosin、(+)doxazosin和(±)doxazosin对VSMCs内Bcl-2蛋白的荧光指数(Fluorescence Index, FI)分别为10.83±4.30、9.50±1.22和8.53±2.20。Bax蛋白的FI值依次为15.77±6.00、10.33±1.12和10.30±1.83。与各溶媒对照组相比较,实验组细胞内的Bcl-2和Bax蛋白含量无显著性差异(P>0.05)。4 (±)Doxazosin及其光学异构体对大鼠主动脉VSMCs内Bcl-2/ Bax的蛋白比值的影响VSMCs经(?)doxazosin、(+)doxazosin和(±)doxazosin处理72 h后,Bcl-2/ Bax蛋白比值分别为0.68±0.01、0.92±0.03和0.82±0.10。与溶媒对照组(0.99±0.06)相比较,(?)doxazosin和(±)doxazosin均显著降低Bcl-2/Bax的蛋白比值(P<0.01和P<0.05),而(+)doxazosin不影响VSMCs的Bcl-2/Bax蛋白比值(P>0.05)。与(+)doxazosin相比,(?)doxazosin明显降低Bcl-2/Bax蛋白比值(P<0.01)。结论:(±)Doxazosin及其光学异构体可以通过阻滞细胞周期G0-S的转换;诱导VSMCs凋亡;从而抑制主动脉VSMCs增殖,并且具有立体结构的选择性,(?)doxazosin的作用强于(+)doxazosin。其基因调控机制可能与降低凋亡蛋白Bcl-2/Bax的蛋白比值相关。