SelK对巨噬细胞免疫功能的影响

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目的:  SelK是一种存在于哺乳动物细胞中的大小为11kd的内质网跨膜硒蛋白,它在淋巴组织和许多类免疫细胞如巨噬细胞中表达水平相对较高。本研究通过干扰抑制SelK的表达和体外加硒促进SelK的表达两方面入手,以探究SelK对巨噬细胞增殖、吞噬、迁移能力和细胞因子表达水平的影响,为进一步探究SelK在巨噬细胞免疫反应中的作用以及如何提高巨噬细胞中SelK的水平提供科学依据。  方法:  首先构建SelK慢病毒干扰巨噬细胞株,并将巨噬细胞分为正常对照组(Mф)、空载体慢病毒转染组(Mф-NC)、SelK慢病毒干扰组(Mф-siSelK)以及硒代蛋氨酸(Se-Met)处理组。用含10%胎牛血清和1%双抗的RPMI1640培养液培养巨噬细胞,然后采用多种实验方法和技术对巨噬细胞的多项免疫功能进行检测。采用逆转录-聚合酶链式反应  (RT-PCR)来检测巨噬细胞中β-actin、Se1K、IL-6和IFN-γ的mRNA水平;采用蛋白质免疫印迹技术来检测SelK蛋白水平、采用CCK-8法来检测巨噬细胞的增殖水平;用巨噬细胞吞噬鸡红细胞法来检测巨噬细胞的吞噬能力;用transwell小室法来检测巨噬细胞的穿孔迁移能力;用酶联免疫吸附测定法来检测巨噬细胞分泌的IL-6和IFN-γ的水平变化;用细胞免疫荧光法观察SelK在巨噬细胞中的位置。  结果:  1.与Mф-NC组相比,Mф-siSelK组SelK mRNA和蛋白的水平、巨噬细胞的增殖、吞噬和迁移能力显著降低,并且巨噬细胞中细胞因子IL-6和IFN-γ的分泌量也显著减少。  2.浓度为1μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞24 h和48h后,能显著性地促进巨噬细胞的增殖(**P<0.01);浓度为100μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞48 h后,能极显著性地抑制巨噬细胞增殖(**P<0.01)。  3.1μmol/L Se-Met能使巨噬细胞中SelK的mRNA水平显著增加(24 h处理组,*P<0.05;48 h处理组,**P<0.01),另外,SelK蛋白的表达量也有所增加(48 h处理组,*P<0.05)。  4.在巨噬细胞中,SelK蛋白所在的区域与内质网标志物KDEL所在的区域重叠。  结论:  1. SelK基因沉默能降低小鼠巨噬细胞的增殖、吞噬和迁移能力以及巨噬细胞中细胞因子IL-6和IFN-γ的表达量。  2.浓度为1μmol/L的 Se-Met能够促进定位于内质网上的SelK的表达和增强巨噬细胞的增殖能力。  3. SelK可能在机体免疫方面发挥着重要的作用。
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