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植物内生细菌是指一种存在于植物健康组织内,可与寄主植物建立互利共生的关系,且不会使植物造成实质性危害的细菌,因此还被称为植物微生态系统中巨大而宝贵的资源库。本研究为发掘西藏豌豆潜在的微生物资源,从西藏采集的豌豆的根、茎、叶以及根瘤中分离和筛选了内生细菌,探究筛选获得的内生细菌的溶磷、固氮和产IAA能力,采用平板对峙法测定菌株的拮抗作用。在西藏农牧学院农场进行大田种植试验,研究筛选菌株对豌豆株高、根长、鲜重、干重、根瘤和叶绿素产生的促生效应。测定豌豆植株的全氮、全磷和全钾含量,探究菌株对豌豆植株的影响。利用革兰氏染色、接触酶试验和甲基红试验探究菌株的生理生化特性。试验结果如下:(1)豌豆内生细菌的分离从西藏农牧学院农场4个采集点采集豌豆植株,采用传统分离培养法纯化获得共50株内生细菌,并对分离得到的内生细菌选用斜面低温保存法进行保存。(2)豌豆内生细菌的促生潜力采用钼锑抗比色法、全自动凯氏定氮法和SalksowskiⅡ比色法分别测定分离得到的50株内生细菌的有效磷含量、含氮量以及分泌IAA含量。在对这50株内生细菌进行的促生能力研究中发现:解有机磷细菌49株,有效磷增量为4.56~1086.25 mg/L,其中有效磷增量最大的菌株是ML-5;产IAA细菌48株,其中菌株LT-1的分泌能力最强,分泌量达214.47 mg/L;固氮菌31株,其中菌株MT-2的固氮量最高,达3.60 mg/L,这31株菌同时具备溶磷、固氮和产IAA的能力。(3)豌豆内生细菌的拮抗作用采用平板对峙法对50株菌进行拮抗试验,经过初筛与复筛,最终获得11株对小麦纹枯病、小麦根腐病、小麦赤霉病、玉米大斑病和番茄早疫病具有良好拮抗作用的菌株。其中菌株Y-1对这5种病原菌均具有良好的拮抗作用,在24 h时菌株Y-1对5株病原菌的广谱抑制率为63.4%,在48 h时为71.6%,在96 h时为75.8%。(4)豌豆内生细菌的促生效应从西藏豌豆植株分离获得的50株内生细菌中挑选10株进行大田试验,试验结果表明豌豆内生细菌对豌豆植株具有不同程度、不同方面的促生作用。其中菌株CT-2在株高、根长、鲜重、干重、根瘤和叶绿素相较于CK,初花期时分别增长38.75%、24.36%、177.42%、44.07%、13.73%和-4.35%,初荚期时分别增长134.78%、34.46%、196.54%、138.49%、50.61%和-6.97%。(5)豌豆植株理化特性研究采用全自动凯氏定氮仪法、钼锑抗比色法和原子吸收仪法分别测定豌豆植株在不同生育期的全氮、全磷以及全钾含量。研究表明,处理CT-2在初花期时其全氮、全磷、全钾的含量与CK相比分别增加了30.02%、145.19%和71.22%,初荚期时与CK相比分别增加了5.64%、-54.23%和28.67%,隶属函数综合评价排序为第1。(6)土壤理化特性研究采用全自动凯氏定氮法、钼锑抗比色法、原子吸收仪法、碱解氮蒸馏法、钼锑抗比色法、乙酸铵-火焰光度计法和p H计分别测定土壤的全氮、全磷、全钾、速效氮、速效磷、速效钾、有机质、p H。研究表明,有机质和全钾含量最高的处理是CK1,与CK相比分别增加了2.33%和19.47%;全磷和速效磷含量最高的处理是CK;全氮含量最高的处理是ML-3,与CK相比增加15.89%;速效氮和速效钾含量最高的处理是CT-2,与CK相比分别增加了69.06%和164.11%;p H值最高的处理是GM-1,最低的是LT-1。(7)菌株生理生化特性研究通过设定盐、酸、碱浓度分别测定菌株的耐盐性、耐酸性和耐碱性,研究表明:菌株ML-3、L-3和CT-2的最适盐浓度分别为CK、4%、CK,最适酸碱度分别为p H7、p H7、p H5。通过设定5种不同碳源、5种不同氮源分别筛选菌株的最佳碳源和氮源,研究表明:菌株ML-3和L-3的最佳碳源和氮源分别是麦芽糖和牛肉膏,菌株CT-2的最佳碳源和氮源分别为甘露醇和蛋白胨。通过革兰氏染色,发现供试的3株菌均为革兰氏阳性。在接触酶试验中发现供试的3株菌均呈阳性反应。在甲基红试验中发现供试的3株菌均呈现阴性反应。