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研究背景：
半胱氨酰白三烯(cysteinylleukotrienes，CysLTs，包括LTC4、LTD4和LTE4)是5-脂氧酶-花生四烯酸代谢途径来源的一类重要炎症介质。CysLTs通过激活半胱氨酰白三烯受体(cysteinylleukotrienesreceptor，CysLT受体，包括两种主要亚型CysLT1和CysLT2受体)参与调节体内诸多病理生理过程，如脑缺血、脑外伤等。
以往研究发现：在整体脑缺血损伤过程中，脑内半胱氨酰白三烯含量增高，半胱氨酰白三烯受体可介导缺血后神经元损伤；给予小鼠皮层注射白三烯D4，可诱导神经元损伤。然而，离体细胞实验结果显示，白三烯D4不能直接诱导原代培养神经元损伤。据以上整体与离体的实验结果的不一致，我们推测：白三烯D4诱导神经元损伤的作用，可能是间接通过脑内的其他类型细胞，如脑内参与炎症调节的主要细胞小胶质细胞介导。小胶质细胞在脑损伤，脑内炎症时迅速激活，对于脑缺血后炎症进程有重要影响。然而，CysLTs是否参与激活小胶质细胞及其激活小胶质细胞的机制，尚待阐明。
研究目的：
观察白三烯D4激活小鼠BV2小胶质细胞的作用，并初步探讨白三烯D4激活BV2细胞的作用机制。
研究方法：
1.以KLH偶联的CysLT1受体多肽(小鼠)免疫家兔制备兔抗小鼠CysLT1受体多克隆抗体，用ELISA法测定抗体效价，以抗原阻断法测定抗体敏感性及特异性；
2.以RT-PCR、Westernblotting检测BV2细胞半胱氨酰白三烯受体CysLT1和CysLT2mRNA和蛋白的表达；以细胞免疫染色法观察CysLT1、CysLT2的亚细胞定位；
3.BV2细胞以不同浓度(0-100nM)白三烯D4(LTD4)作用24h，光镜下观察小胶质细胞形态变化；以CCK法检测细胞活性变化以反映细胞增殖；以荧光微珠示踪法检测BV2细胞吞噬变化。
4.以CysLT1受体选择性拮抗剂Montelukast(1-1000nM)、CysLT2受体选择性拮抗剂HAMI3379(10-10000nM)和CysLT1/CysLT2受体双重拮抗剂BAYu9773(1-1000nM)在预处理30分钟后再给予LTD4作用24h(期间拮抗剂全程给药)，以荧光微珠追踪法检测细胞吞噬变化，以RT-PCR法检测细胞炎症因子TNF-α、IL-β和IL-6的mRNA表达水平变化。
研究结果：
1.成功制备了兔抗小鼠CysLT1受体多克隆抗体，ELISA测定显示，制备的家兔抗小鼠CysLT1受体抗体的效价大于1/32728，对CysLT1受体的特异性强，对CysLT2受体和GPR17基本无交叉反应；
2.BV2细胞在mRNA和蛋白水平表达CysLT1、CysLT2；免疫染色显示CysLT1、CysLT2受体主要表达在胞膜；
3.LTD4作用24h，BV2细胞形态变化不明显，BV2细胞活性无明显变化。
4.LTD4(100nM)作用24h，能显著提高BV2细胞的吞噬能力、上调IL-6的mRNA表达，但不诱导TNF-α、IL-1β的表达上调；
5.CysLT1受体选择性拮抗剂Montelukast(100nM)，CysLT2选择性拮抗剂HAM13379(100,1000和10000nM)以及CysLT1/CysLT2受体双重拮抗剂BAYu9773(100nM)预给药30min后，再给予LTD4100nM作用24h，能进一步增强吞噬；BAYu9773(1nM)能拮抗LTD4诱导的吞噬；
6.CysLT1受体选择性拮抗剂Montelukast(1nM)，CysLT1/CysLT2受体双重拮抗剂BAYu9773(1nM和10nM)处理可减弱LTD4100nM诱导的IL-6mRNA表达上调，而不同浓度的CysLT2选择性拮抗剂HAMI3379对此没有影响。
结论：
LTD4可激活小鼠BV2小胶质细胞，表现为细胞吞噬能力增强和炎症细胞因子IL-6表达上调；LTD4诱导IL-6表达上调由CysLT1受体介导，而LTD4增强BV2细胞吞噬的机制需进一步研究确定。