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曲安奈德是糖皮质激素类药物,对多种眼科疾病具有良好的治疗作用。而局部滴眼给药是非侵入性的给药方式,其副作用低、顺应性好、安全性高。但由于眼部的特殊结构,采用局部滴眼给药方式递送药物难以达到有效的治疗浓度。为增加曲安奈德滴眼给药的生物利用度,本课题制备了体系中含有穿膜肽、透明质酸等不同特性的曲安奈德PLGA-NPs,并与体系中有无2-HP-β-CD的PLGA-NPs纳米粒进行对比,对不同特性纳米粒增加眼部生物利用度及其跨角膜屏障能力的相关性进行探讨。采用乳化溶剂挥发法制备不同特性PLGA纳米粒,并对其粒径、电位和形貌特征进行分析,PLGA-NPs、CPP-PLGA-NPs、HA-PLGA-NPs以及不含2-HP-β-CD的PLGA-NPs平均粒径分别为83.03±1.4nm、75.17±0.47 nm、103.1±1.1 nm和96.17±0.93 nm;Zate电位分别为-（10.94±0.46）mV、2.6±0.31 mV、-（33.53±2.07）mV和-（12.89±2.09）mV。采用透射电镜对4种不同特性纳米粒的形态进行观察,纳米粒均呈圆球形。4种不同特性纳米粒的表面张力在40-46 mN/m范围之间、pH值在7.13～7.42范围内,渗透压在281～278 mOsmol·kg-1范围内,所制备的纳米粒滴眼液对视觉影响小,符合眼用制剂要求。体系中含HA可增加纳米粒的生物粘附性,2-HP-β-CD的加入是有效提高体系包封率的关键因素。采用透析袋法对4种不同特性纳米粒的释放情况进行考察,结果表明,2-HP-β-CD的加入对药物的释放具有促进作用,而CPP和HA的加入并未对释放产生太大影响。对4种不同特性纳米粒的体外释放进行模型拟合,结果表明4种特性纳米粒的释放均呈Ritger-Peppas动力学释放模型。采用兔离体角膜法对药物渗透性进行评价,结果显示4种特性纳米粒,药物的渗透累积量与时间的曲线呈线性近似关系。HA-PLGA-NPs,CPP-PLGA-NPs和PLGA-NPs的8h累计渗透量分别是不含2-HP-β-CD的PLGA-NPs的3.9、3.0和2.7倍。其中CPP-PLGA-NPs和PLGA-NPs渗透结果无显著性差异,其原因可能与离体角膜的生物活性低有关。采用CCK-8法对4种不同特性载香豆素-6纳米粒的细胞毒性进行评价,结果显示在8h内细胞存活率均在90%以上,4种纳米粒的细胞毒性较低。采用细胞功能抑制剂与流式细胞术对4种不同特性纳米粒的摄取机制进行分析,结果显示不含2-HP-β-CD的PLGA-NPs的摄取过程中,主要以巨胞饮为主,而小窝蛋白/脂筏结构介导的内吞和网格蛋白介导的内吞发挥一定的作用,并且过程与高尔基体密切相关。PLGA-NPs在摄取过程中,主要以巨胞饮为主,小窝蛋白/脂筏结构介导的内吞同时也发挥了一定的作用,与不含2-HP-β-CD的PLGA-NPs相比,2-HP-β-CD的加入,加强了巨胞饮作用,弱化了小窝蛋白/脂筏结构介导的内吞作用,而且摄取过程与高尔基体的联系也不那么紧密。而CPP的加入,加强了巨胞饮作用和网格蛋白介导的内吞。HA的加入使得摄取过程与高尔基体联系更加密切,且加强了网格蛋白介导的内吞作用。采用MDCK上皮细胞屏障模型对4种不同特性纳米粒的上皮屏障渗透性进行评价,结果表明CPP-PLGA-NPs,HA-PLGA-NPs和PLGA-NPs的4h渗透量分别比不含2-HP-β-CD的PLGA-NPs增加了103.1%、68.87%和44.0%。采用细胞功能抑制剂与MDCK上皮细胞屏障模型对跨膜转运机制进行研究,不同特性纳米粒的跨膜转运均是以能量依赖为主导的过程,对小窝蛋白与网格蛋白介导的内吞作用、巨胞饮作用以及与高尔基体相关转运的抑制对不含2-HP-β-CD的PLGA-NPs的跨膜转运影响较小,且跨膜转运过程与质膜胆固醇密切相关,推测可能存在转运效率更高的跨膜途径。相较于不含2-HP-β-CD的PLGA-NPs,2-HP-β-CD的加入,使得小窝蛋白/脂筏结构与网格蛋白介导的内吞作用与巨胞饮作用在PLGA-NPs跨膜转运过程中发挥一定作用。体系中CPP的加入强化了高尔基体在跨膜转运过程中的作用,并且质膜胆固醇分布均一对跨膜转运的增强作用大幅减弱,推测CPP加入后纳米粒可能会使得质膜胆固醇的分布均一,HA加入对纳米粒跨膜机制并没有产生太大的影响。采用滤纸条法对4种不同特性纳米粒的泪液消除情况进行评价,结果表明,相比于不含2-HP-β-CD的PLGA-NPs,HA-PLGA-NPs,PLGA-NPs和CPP-PLGA-NPs均可提高药物在眼表的滞留时间和滞留量,其中HA-PLGA-NPs最为显著。采用微透析技术测定房水药动学,结果显示,HA-PLGA-NPs,CPP-PLGA-NPs和PLGA-NPs的Cmax分别为5.73、4.19和3.03μg·mL-1,分别是不含2-HP-β-CD的PLGA-NPs(0.98μg·mL-1)的5.85、4.27和3.09倍,而AUC0→360分别为8.06、5.05和3.46μg·mL-1·min,分别是不含2-HP-β-CD的PLGA-NPs(0.98μg·mL-1·min)的8.22、5.15和3.53倍。HA修饰有效提高纳米粒的眼表滞留与眼内生物利用度,而CPP促进纳米粒的渗透,在房水药动学中也发挥着一定作用。全文通过对4种不同特性纳米粒的理化特性、体外释放及兔离体角膜渗透性、细胞摄取和跨上皮屏障机制、泪液消除动力学以及房水药动学的进行探讨,结果显示CPP-PLGA-NPs主要通过提高纳米粒的跨膜转运能力,而HA-PLGA-NPs主要通过增强纳米粒的眼表滞留,以改善药物在房水的生物利用度。所制备的HA-PLGA-NPs和CPP-PLGA-NPs分别在延长眼表滞留和增强跨屏障能力上各有优点,为进一步研究增强纳米制剂跨眼屏障奠定了基础。