肿瘤微环境的靶向治疗已取得突破性的研究进展并被应用于临床,包括直接使用抗体靶向和封闭免疫学相关信号通路,或者将抗体与其它功能蛋白或片段融合表达,进行靶向治疗。此外,细胞因子治疗对肿瘤微环境中相关免疫细胞信号通路的激活发挥着重要的作用。本课题聚焦于免疫检查点分子和细胞因子,设计并表达mPD1（mouse programmed death-1）分子胞外段和mIL-15（mouse interleukin-15）功能片段的融合蛋白。该融合蛋白将以mPD1区段为弹头,通过靶向肿瘤细胞表面的mPD-L1（mouse programmed death ligand-1）分子,引导mIL-15进入肿瘤微环境中并发挥其生物学功能。在重组质粒设计时,分别在N段加上分泌蛋白VEGFA的信号肽,用来引导融合蛋白分泌;两个蛋白之间加上（GGGGS）₃的linker用来防止两个蛋白对彼此正确折叠的影响;C端加上His-tag标签,用来纯化融合蛋白。本论文主要包括以下三部分研究内容:（1）利用分子克隆技术,包括双酶切、PCR、无缝克隆等技术构建重组质粒Migr1-mPD1-mIL-15,经过菌落PCR和核酸测序鉴定确定重组质粒构建成功。（2）将构建好的重组质粒转染到293T细胞系进行真核表达,培养48小时后收集培养基上清并浓缩和纯化,经ELISA、Western-Blot、免疫荧光确定融合蛋白正确表达。（3）将融合蛋白缓冲液与IFNγ刺激后mPD-L1高表达的B16F10细胞共孵育,再通过流式细胞术检测到融合蛋白与mPD-L1的结合功能。将融合蛋白缓冲液与小鼠脾脏细胞共孵育,通过流式细胞术检测相关淋巴细胞细胞表面或胞内标志物的表达水平,确定了融合蛋白mIL-15区段的部分免疫学功能。实验中我们验证了融合蛋白的靶向功能和部分免疫学功能,为相关领域的研究提供了借鉴意义。