前期研究发现,鲤春病毒血症病毒(Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV)感染EPC细胞可以诱导氧化应激,下调血红素加氧酶1(Heme oxygen-1,HO-1)的表达,扰乱细胞内氧化还原平衡,造成DNA和蛋白质氧化损伤,是SVCV重要的致病机制之一。Nrf2-ARE是机体对抗氧化应激最重要的内源性信号通路,由Nrf2介导的下游效应基因在细胞抗氧化、抗炎症、抗凋亡等过程中发挥着关键性作用,并参与到多种病毒的感染和复制过程中。为此,本研究系统探讨了Nrf2-ARE信号通路与SVCV之间的相互作用关系,其结果有助于深入了解SVCV的致病机理,为SVCV的预防和治疗提供新的解决方案。主要研究结果如下:1.激活剂SFN和CDDO-Me对Nrf2-ARE信号通路的激活效果以及对SVCV复制的影响用MTT法测定了Nrf2的激活剂SFN和CDDO-Me对FHM细胞的LD50(48h)分别为37.65μM和6.823μM。接着,通过RT-q PCR和Western blot在细胞水平上检测两种激活剂对FHM细胞Nrf2-ARE信号通路的激活效果。结果显示,SFN处理前期Nrf2及下游效应基因HO-1和SOD1的转录水平略微升高,在12h达到峰值,24h又恢复到正常水平。CDDO-Me处理组,Nrf2转录水平持续升高并在24h具有显著性差异;HO-1在3h、6h显著降低,12h恢复至正常水平,24h又显著性升高;SOD1转录水平在3h到24h持续升高。Nrf2和HO-1蛋白的表达量,在两种激活剂处理16h后都显著高于对照组。总抗氧化能力检测结果显示,两种激活剂都能显著提高FHM细胞的总抗氧化能力,尤其是在刺激12h时细胞的抗氧化能力最强。上述结果表明,激活剂SFN和CDDO-Me刺激FHM细胞可以激活Nrf2-ARE信号通路,提高细胞总抗氧核能力。接着分别用两种激活剂预处理FHM细胞,再以0.1MOI的SVCV感染,RT-q PCR检测SVCV-G基因的转录水平并测定病毒滴度。结果显示,两种激活剂预处理在12h和24h极显著降低SVCV-G基因的转录水平,降低病毒滴度,抑制SVCV的复制。2.Nrf2和HO-1敲降对SVCV复制的影响以Nrf2-si RNA和HO-1-si RNA转染FHM细胞,RT-q PCR、Western blot检测Nrf2-ARE信号通路的抑制情况并定量检测SVCV-G基因的转录水平。结果显示,Nrf2-si RNA处理后能够显著降低Nrf2、HO-1和SOD1的转录水平,抑制Nrf2和HO-1蛋白的表达,降低细胞总抗氧化能力,废除两种激活剂对Nrf2-ARE信号通路的激活作用。Nrf2-si RNA和HO-1-si RNA转染FHM细胞后再以0.1MOI的SVCV感染,24h后SVCV-G基因的转录水平均显著高于对照组,且变化趋势一致。