【摘 要】
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卵泡液促减数分裂甾醇（follicle fluid-meiosis activating sterol,FF-MAS）对哺乳动物卵母细胞的减数分裂恢复及其随后的早期胚胎发育具有有益作用,但尚未阐明这些作用的信号转导途径。因此,本研究通过在猪卵丘-卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complexes,COCs）体外成熟培养体系中加入不同浓度的AY 9944-A-7和酮康唑以改变FF-MA
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.31601945）；
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卵泡液促减数分裂甾醇（follicle fluid-meiosis activating sterol,FF-MAS）对哺乳动物卵母细胞的减数分裂恢复及其随后的早期胚胎发育具有有益作用,但尚未阐明这些作用的信号转导途径。因此,本研究通过在猪卵丘-卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complexes,COCs）体外成熟培养体系中加入不同浓度的AY 9944-A-7和酮康唑以改变FF-MAS的内源积累,研究是否丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）通路参与FF-MAS诱导的猪卵母细胞减数分裂恢复。本试验结果如下:（1）分别在猪COCs体外成熟培养体系中加0、20、30、40μmol/L AY 9944-A-7或10、20、30μmol/L酮康唑,观察卵母细胞的成熟程度,并用荧光定量检测MAPK信号通路中相关基因的m RNA表达水平。结果表明:当培养基中添加30μmol/L AY9944-A-7时,卵母细胞的成熟率显著提高（P<0.05）,且MEK、ERK1和ERK2 m RNA表达水平也最高。而加入酮康唑后,成熟率降低,添加30μmol/L酮康唑,卵母细胞的退化率显著上升（P<0.05）,且最大程度地抑制了c-mos,MEK,ERK1和ERK2 m RNA表达。（2）猪COCs在含有30μmol/L AY 9944-A-7或30μmol/L酮康唑的IVM培养基中培养0、12、24、36或44 h,用荧光定量和Western blotting测定卵母细胞中c-mos,MEK1,MEK2和ERK 1/2的m RNA和蛋白表达水平。结果表明,随着培养时间的延长,AY9944-A-7组c-mos m RNA和蛋白表达水平在12 h达到峰值,然后逐渐下降;MEK1和MEK2 m RNA和蛋白表达水平在44 h达到峰值,在24 h最低,呈先下降后上升的趋势;ERK1/2的m RNA和蛋白表达水平均在44 h达到峰值。在酮康唑组中,培养12 h后,c-mos,MEK1,MEK2和ERK1/2 m RNA和蛋白表达均显著下降。本研究证实了FF-MAS有促进猪卵母细胞恢复减数分裂的作用,而且本研究结果表明MAPK信号通路参与了FF-MAS诱导的猪卵母细胞体外成熟。
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