水环境污染和水资源短缺是全球淡水资源正面临的两大主要问题,污水回用在一定适用范围内,为我们提供了一个经济可靠的新资源,并且可以节省优质的饮用水源。目前,城市污水已成为一种稳定的再生水源,回用量也日渐增多。虽然城市污水经过二级处理后,各种病原微生物的含量均会有所下降,但是还有一些污染物质如细菌、病毒、微生物、影响回用的溶解性物质是二级处理不能完全去除的。而伤寒沙门氏菌则是其中最典型的肠道病原菌,在水体中分布广泛,是引起霍乱、伤寒等肠道传染病和食物中毒的主要病原菌。针对这种情况,建立快速、特异、灵敏的伤寒沙门氏菌检测方法刻不容缓,这对于以后改善污水处理的工艺以及评价病原菌所带来的健康风险具有重要的理论指导意义和使用价值。为了研究实时荧光定量PCR技术(QPCR)在检测城市二级处理出水中伤寒沙门氏菌方面的应用价值,设计并合成伤寒沙门氏菌一对涵盖性和特异性均较强的引物ST3和ST4,建立伤寒沙门氏菌的定量PCR检测方法。本研究采用膜过滤洗脱法对城市二级处理出水进行浓缩,分析了影响伤寒沙门氏菌回收率的因素,并考察了使用不同孔径的定性滤纸预过滤水样对提高伤寒沙门氏菌回收率的效果,最终确定了前处理的最佳方法。同时,应用QPCR检测方法对城市污水二级处理出水中的伤寒沙门氏菌进行连续监测,并将检测结果进行了比较分析,结果表明:本方法只能从含有伤寒沙门氏菌的水样中检测出特异性扩增荧光信号,而不与其他细菌的DNA发生交叉反应,充分证明了其检测伤寒沙门氏菌的高度特异性和敏感性。本研究建立的QPCR方法检测伤寒沙门氏菌重组质粒的标准品,在模板量为2.8×10~1～2.8×10~8 GEC时呈现良好的线性关系,相关系数为0.9955,最小可检出量为2.8×10~1 GEC/PCR反应,且从样本DNA提取到报告结果耗时不超过4 h。本研究所建立的QPCR方法在检测效果和检测效率方面都具有很明显的优势,适用于城市污水厂二级处理出水的伤寒沙门氏菌的定量检测。相信随着QPCR技术的进一步完善,其必将在环境微生物领域产生更重要的影响。