【摘 要】
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目的:1.研究大鼠外伤性视神经损伤模型视网膜神经节细胞(RGCs)数目的变化2.研究大鼠外伤性视神经损伤模型视觉电生理的变化方法:实验一:大鼠外伤性视神经损伤模型的建立及视网
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目的:1.研究大鼠外伤性视神经损伤模型视网膜神经节细胞(RGCs)数目的变化2.研究大鼠外伤性视神经损伤模型视觉电生理的变化方法:实验一:大鼠外伤性视神经损伤模型的建立及视网膜神经节细胞(RGCs)计数1.荧光金逆行标记:在双侧上丘颅骨表面对应投影位置打孔后,用微型注射器向双侧上丘注入荧光金。2.建立大鼠视神经夹持伤模型:荧光金逆行标记7d后,结膜入路暴露Wistar大鼠左侧视神经,特制反向镊在大鼠左侧眼球球后2mm处垂直钳夹视神经10s,右侧眼球不做处理。3.计数RGCs:建立夹持伤模型7d后处死大鼠,摘除眼球,在4%多聚甲醛中固定30min做视网膜铺片,荧光显微镜下拍照,Photoshop CC计数RGCs数目。实验二:大鼠外伤性视神经损伤模型的视觉电生理检测1.建立大鼠视神经夹持伤模型2.检测f-VEP和f-ERG:分别检测大鼠正常眼及夹伤眼在夹伤后第5d的f-VEP变化及伤后第5d、12d、21d、28d的f-ERG变化。结果:1.正常眼RGCs平均密度为2400±150/mm2,夹伤眼平均密度为1063±143/mm2。在夹持伤后第7d,正常组RGCs平均密度明显大于夹伤组(P<0.001),夹伤组RGCs减少约55.7%。2.大鼠正常眼与夹伤眼术后第5d的f-VEP均可引出典型的N-P-N波形。夹伤眼在第5d时P1波潜伏期较正常眼延长(P<0.001),振幅较正常眼降低(P<0.05)。3.夹伤眼视杆细胞反应b波,最大反应a、b波、振荡电位O2波及视锥细胞反应b波振幅较正常眼在伤后5d、12d、21d、28d均明显降低(P<0.01),各波潜伏期与正常眼无统计学差异(P>0.05)。夹伤眼在5d、12d、21d、28d各波振幅随损伤天数延长存在下降趋势。结论:1.应用特制反向镊可制作大鼠视神经夹持伤模型,模型重复性好,致伤状态稳定。2.荧光金作为逆行示踪剂是视神经损伤后对RGCs进行定量分析的良好指标。大鼠视神经夹持伤后第7d可观察到RGCs显著下降。3.大鼠视神经夹持伤后第5d夹伤眼f-VEP的P1波潜伏期延长、振幅下降显著,视觉传导通路功能发生障碍。第5d、12d、21d、28d夹伤眼f-ERG各波振幅较正常眼明显降低,视网膜各层细胞的功能状态发生改变。
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