血清白蛋白与小分子相互作用的荧光光谱法研究

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分子间的相互作用因其在生命科学、环境科学、临床医学等众多领域的广泛需要和重要作用而受到关注。由于蛋白质在人体内的重要功能和地位,基于蛋白质为受体的分子间相互作用成为近年来相互作用研究的焦点。许多相互作用分析的研究都从血清白蛋白分子入手,因为血清白蛋白是一种内源性荧光大分子,用荧光光谱法可以简便、快速、灵敏、直观地反映出它与其它物质之间的相互作用情况,所以,荧光光谱法成为人们研究血清白蛋白与其它物质相互作用的主要手段。论文以牛血清白蛋白为例,对血清白蛋白与其它物质之间的相互作用进行了系统的荧光光谱法研究。主要的内容和结果概括如下:从理论上推断,以血清白蛋白为检测对象的传统荧光光谱法存在方法上的缺陷和不足。传统荧光光谱方法将血清白蛋白大分子中几个色氨酸残基的荧光信号当作了整体分子性质的反映,影响了相互作用信息的真实性和完整性。通过理论上的分析,提出了以具有荧光性质的小分子配体为检测对象的改进荧光光谱法。与传统的方法相比,改进荧光光谱法更能全面真实地反映相互作用的信息。针对相互作用研究中的荧光光谱重叠现象,提出了“荧光背景扣除法”。该方法有效解决了相互作用体系中两种物质光谱重叠的问题。拓展了荧光光谱法进行相互作用研究的对象和范围。以十二烷基苯磺酸钠、伯氨喹、苯海索、曲拉通X-100、西布曲明、西酞普兰等小分子化合物为配体,采用传统荧光光谱法、改进荧光光谱法以及荧光背景扣除法研究了其与牛血清白蛋白的相互作用。所得结果与本研究在理论上的推断一致,证明了传统方法的不足,证明了改进荧光光谱法和荧光背景扣除法的可靠性。从理论上将适用于荧光光谱法研究的相互作用体系归纳为四种类型体系:a.色氨酸残基的荧光信号可以表达整个蛋白分子的性质及变化,即配体只作用于色氨酸残基或只影响色氨酸残基的微环境,无论以蛋白大分子或配体小分子为荧光检测对象得到的结合常数无明显差异;b.色氨酸残基的荧光信号不能表达整个蛋白分子的性质及变化,即配体不仅仅作用于色氨酸残基或只影响色氨酸残基的微环境,用具有荧光的小分子配体可以直接获得其被蛋白分子猝灭荧光的谱图和数据;c.色氨酸残基的荧光信号不能表达整个蛋白分子的性质及变化,且配体的荧光受到蛋白荧光的强烈干扰,采用“荧光背景扣除法”对谱图进行优化后可以获得有效的荧光猝灭谱图;d.色氨酸残基的荧光信号不能表达整个蛋白分子的性质及变化,且配体的荧光受到蛋白荧光的强烈干扰,如果采用“荧光背景扣除法”对谱图进行优化后仍然不能获得有效的荧光猝灭谱图,这类体系不适用于采用荧光方法进行研究。
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