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目的：
探讨不同浓度2，3，7，8-四氯二苯并对二恶英(2，3，7，8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD)对C57BL/6N小鼠腭突间充质细胞的影响及其作用机制，从而为预防腭裂的发生提供理论依据。
方法：
将6~8周龄SPF级健康C57BL/6N近交系小鼠在屏障系统饲养2周后，于晚8点按照雌雄3∶1比例进行合笼，次日晨8点检查合笼雌鼠阴栓情况，查到阴栓者即为妊娠0天(gestation day 0，GD0)。将获得的怀孕雌鼠按照随机数字表法分为两组：实验组和对照组。于GD10对实验组孕鼠以64μg/kgTCDD进行一次性灌胃，对照组孕鼠灌以等量玉米油。取两组GD13、GD14和GD15时间点灌胃胎鼠的头部，冠状切片，进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色，于光学显微镜下观察并比较不同时间点腭突的发育情况。同时，对未灌胃孕鼠于GD13行颈椎脱臼处死，收集胎鼠腭突组织，分离出胎鼠腭突间充质(mouse embryonic palate mesenchymal，MEPM)细胞以建立原代细胞培养模型。利用生长状态良好的第三代MEPM细胞进行后续的体外实验部分。按照TCDD作用浓度的不同可分为4组：0nmol/L(对照组)、0.1nmol/L、1nmol/L及10nmol/L(nM)。利用MTT实验和Brdu实验检测不同浓度TCDD作用小鼠MEPM细胞72h后对细胞增殖的影响；利用Tunel实验检测不同浓度TCDD对MEPM细胞凋亡的影响；通过Real-timePCR检测不同浓度TCDD对MEPM细胞内增殖相关基因PCNA和凋亡相关基因Bax、Caspase3表达的影响；利用Westernblot检测不同浓度TCDD对MEPM细胞内增殖相关蛋白PCNA和凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达的影响。本实验结果采用统计软件SPSS25.0进行分析，P＜0.05为差异有统计学意义。
结果：
体内HE染色实验结果显示：在GD13时，TCDD组和对照组胎鼠的腭突均沿着舌体的两侧垂直生长。在GD14时，对照组中舌体的位置开始下降，两侧腭突抬升到舌体的上方，并朝向中线水平生长。然而，TCDD组的双侧腭突虽然能够抬升到舌体的上方，但是两者并没有相互接触，发育迟缓，留下了比较大的缝隙。在GD15时，与对照组中形成完整的次级腭相比，TCDD组的腭突仍然不能完成融合，证实了腭裂表型的发生。
MTT实验结果显示，随着TCDD浓度的增加，MEPM细胞活性逐渐降低，并呈一定的剂量效应关系。Brdu结果显示，随着TCDD浓度增加，Brdu阳性率逐渐降低。Tunel结果显示，随着TCDD浓度的增加，MEPM细胞凋亡指数逐渐增加。Real-timePCR结果显示，与对照组相比，0.1nM、1nM及10nMTCDD组MEPM细胞PCNA基因相对表达量降低，Bax、Caspase3基因相对表达量升高。Westernblot结果与Real-timePCR结果相对比较一致，随着TCDD浓度增加，PCNA蛋白表达量呈下降趋势，Bax和Caspase3蛋白表达量呈上升趋势。
结论：
(1)TCDD能抑制腭突间充质细胞的增殖并促进其凋亡，这可能是腭裂发生的原因之一。
(2)TCDD抑制腭突间充质细胞凋亡可能是通过线粒体凋亡途径。
探讨不同浓度2，3，7，8-四氯二苯并对二恶英(2，3，7，8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD)对C57BL/6N小鼠腭突间充质细胞的影响及其作用机制，从而为预防腭裂的发生提供理论依据。
方法：
将6~8周龄SPF级健康C57BL/6N近交系小鼠在屏障系统饲养2周后，于晚8点按照雌雄3∶1比例进行合笼，次日晨8点检查合笼雌鼠阴栓情况，查到阴栓者即为妊娠0天(gestation day 0，GD0)。将获得的怀孕雌鼠按照随机数字表法分为两组：实验组和对照组。于GD10对实验组孕鼠以64μg/kgTCDD进行一次性灌胃，对照组孕鼠灌以等量玉米油。取两组GD13、GD14和GD15时间点灌胃胎鼠的头部，冠状切片，进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色，于光学显微镜下观察并比较不同时间点腭突的发育情况。同时，对未灌胃孕鼠于GD13行颈椎脱臼处死，收集胎鼠腭突组织，分离出胎鼠腭突间充质(mouse embryonic palate mesenchymal，MEPM)细胞以建立原代细胞培养模型。利用生长状态良好的第三代MEPM细胞进行后续的体外实验部分。按照TCDD作用浓度的不同可分为4组：0nmol/L(对照组)、0.1nmol/L、1nmol/L及10nmol/L(nM)。利用MTT实验和Brdu实验检测不同浓度TCDD作用小鼠MEPM细胞72h后对细胞增殖的影响；利用Tunel实验检测不同浓度TCDD对MEPM细胞凋亡的影响；通过Real-timePCR检测不同浓度TCDD对MEPM细胞内增殖相关基因PCNA和凋亡相关基因Bax、Caspase3表达的影响；利用Westernblot检测不同浓度TCDD对MEPM细胞内增殖相关蛋白PCNA和凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达的影响。本实验结果采用统计软件SPSS25.0进行分析，P＜0.05为差异有统计学意义。
结果：
体内HE染色实验结果显示：在GD13时，TCDD组和对照组胎鼠的腭突均沿着舌体的两侧垂直生长。在GD14时，对照组中舌体的位置开始下降，两侧腭突抬升到舌体的上方，并朝向中线水平生长。然而，TCDD组的双侧腭突虽然能够抬升到舌体的上方，但是两者并没有相互接触，发育迟缓，留下了比较大的缝隙。在GD15时，与对照组中形成完整的次级腭相比，TCDD组的腭突仍然不能完成融合，证实了腭裂表型的发生。
MTT实验结果显示，随着TCDD浓度的增加，MEPM细胞活性逐渐降低，并呈一定的剂量效应关系。Brdu结果显示，随着TCDD浓度增加，Brdu阳性率逐渐降低。Tunel结果显示，随着TCDD浓度的增加，MEPM细胞凋亡指数逐渐增加。Real-timePCR结果显示，与对照组相比，0.1nM、1nM及10nMTCDD组MEPM细胞PCNA基因相对表达量降低，Bax、Caspase3基因相对表达量升高。Westernblot结果与Real-timePCR结果相对比较一致，随着TCDD浓度增加，PCNA蛋白表达量呈下降趋势，Bax和Caspase3蛋白表达量呈上升趋势。
结论：
(1)TCDD能抑制腭突间充质细胞的增殖并促进其凋亡，这可能是腭裂发生的原因之一。
(2)TCDD抑制腭突间充质细胞凋亡可能是通过线粒体凋亡途径。