精准热疗上调MicroRNA-409-3p正向调控KLF17抑制胃癌细胞侵袭迁移

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实验摘要:
  已有大量文献证实miR-409-3p在人体多种肿瘤中为抑癌性miRNA。本实验通过研究miR-409-3p在胃癌组织中的表达及其作用,并进一步探究miR-409-3p在胃癌细胞中对KLF17基因的调控关系。检测胃癌细胞经过精准热疗后的相关miR-409-3p和KLF17的表达水平,从而阐明精准热疗在胃癌细胞中的调控机制。在精准热疗肿瘤调控机制方面会有更加清晰的了解。
  实验方法:
  选取5种胃癌细胞株(SGC7901、HGC27、BGC823、MGC803、MKN45)和正常胃粘膜细胞株(GES1)。通过RT-qpcr检测各细胞系中的miR-409-3p的表达。通过划痕、侵袭迁移实验证实miR-409-3p的表达水平对胃癌细胞的侵袭迁移能力的影响。运用RT-qpcr和Western-Blot实验检测胃癌细胞中不同miR-409-3p表达水平对KLF17基因的影响。利用双荧光素酶实验验证miR-409-3p与KLF17关系。并对胃癌细胞在不同温度下进行水浴,检测miR-409-3p和KLF17基因的表达水平。
  实验结果:
  RT-qpcr的数据结果显示胃癌细胞株中的miR-409-3p较胃粘膜正常组织有明显的表达水平下降。划痕、侵袭迁移实验表明:miR-409-3p表达水平高的胃癌细胞,侵袭迁移能力差;相反,miR-409-3p表达水平低的胃癌细胞,侵袭迁移能力强。通过RT-qpcr和Western-Blot明确miRNA-409-3p对胃癌细胞KLF17存在调控关系:上调胃癌细胞的miR-409-3p表达,KLF17基因在RNA和蛋白表达水平都有明显升高;下调胃癌细胞miR-409-3p的表达,KLF17基因在RNA和蛋白表达水平都有明显的下降。双荧光素酶实验表明,KLF17是miR-409-3p的靶基因。精准热疗胃癌细胞对miR-409-3p和KLF17的表达水平有明显的提高作用。
  实验结论:
  1.miR-409-3p在胃癌中低表达,提高miR-409-3p的表达抑制胃癌侵袭迁移的能力,降低miR-409-3p的表达提高胃癌侵袭迁移的能力。miR-409-3p在胃癌组织中充当抑癌因子的角色。
  2.MiR-409-3p的表达水平与KLF17的表达水平呈正相关关系。KLF17是miR-409-3p直接靶向基因。
  3.精准热疗胃癌细胞可提高miR-409-3p和KLF17表达水平。
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